**蜂毒共同合作

蜂毒肽制备方法

目前获取蜂毒肽的方法有3种，化学合成、从粗蜂毒中分离纯化和生物工程法。利用化学合成的方法可以获得具有生物活性的蜂毒肽纯品，但其成本太高，并不适合蜂毒肽的生产，实际应用较少。目前，获取蜂毒肽纯品的主要途径是从粗蜂毒中分离纯化。分离纯化方法以色谱理论为基础，随着色谱技术的发展以及与其他提取工艺的结合，操作成本逐渐降低，产量和纯度有所提高。利用生物工程技术可以诱导蜂毒肽基因在工程菌中表达，然后收集纯化表达蛋白，从而得到蜂毒肽纯品。由于蜂毒肽有破坏细胞膜以及致死细胞毒性，其在工程菌中的直接表达无法实现。面对这个问题，科学家们找到了在工程菌中表达蜂毒肽融合蛋白的方法，并在融合蛋白的选择及后期分离纯化上进行了大量研究，取得较大进展。 用于工业生产的蜂毒主要有两种。**蜂毒共同合作

蜂毒的药理作用:蜂毒具有***的药理活性，这是它临床应用的

依据。

(1)蜂毒对神经系统的作用:

蜂毒具有神经毒性，全蜂毒及蜂毒肽、蜂毒明肽、托肽平等都具有显

著的亲神经特性。蜂毒的中枢性抗胆碱活性和神经节阻滞作用是它**古

老的特性。

A、全蜂毒和蜂毒肽对烟碱型胆碱能受体有选择性***作用，这是蜂毒

对脑高级部分影响的基础。早在1971年，奥尔洛夫教授的实验就已证明

蜂毒能使大白鼠听源性痉挛发生率明显降低，认为是蜂毒阻带网状结构

胆碱，反应系统，使原发***理兴奋灶在该区不能形成和阻止其过分***

的刺激传入的结果。给大白鼠皮下注射10mg/kg剂里烟碱，**的 鼠出

现特有的痉挛发作，预先注射2mgkg剂里的蜂毒或蜂毒肽，烟碱型痉挛

的发生率降至259%-3%.。预先给家免注射0.75mg/kg的蜂毒，其烟碱型

痉挛的发生率由80%降至38.4%，而且潜伏期延长，痉挛持续时间缩短。

蜂毒能防止鼠和家免烟碱型痉挛发生或能使其强度明显减弱，显然，蜂

毒抗痉挛作用与其阻滞中枢性烟碱敏感系统能力关系极大。 **蜂毒共同合作蜂毒是具有 高度药理学和生物学活性的复杂混和物。

蜂毒肽分子量小，免疫原性低，不易产生过敏反应;因其是破坏细胞膜而导致细胞的死亡，因此它不用进入细胞，在细胞外即可显示出其破坏**细胞毒性。澳大利亚联邦科学与工业研究组织(CSIRo)DERiven博士领导的分子生物学研究小组制造的以蜂毒肽为"弹头"的抗*** 。蜂***可***肝*细胞的生长、增殖，并且减少增殖细胞中和抗原附性细胞的表达，影响细胞周期的比率。

抗凝、纤溶作用:通过***凝血活酶和凝血酶原***物生成，以及***血小板的聚集，可以消除血栓形成前的状态，临床可用于***和血栓形成的防治。蜂毒肽通过破坏红细胞膜的通透性，具有直接溶血作用。

王秋波等通过人工合成含特异性酶切位点的AB两条寡核苦酸片段，在Klenow酶作用下形成目的基因，用限制型内切酶HindⅢ，XmnⅠ同时酶切目的基因和表达载体Pmal-p2质粒，在T4连接酶的作用下构建两者的重组体，通过α-互补筛选出附性克隆，并通过特异性酶切和测序分析进行鉴定，获得重组蜂毒肽的原核表达克隆。

2003年，刘岭等通过MTT法对SMMC-7721、BEL-7402和Hep-3B三种肝*细胞系进行研究，考察蜂毒肽*****的量效关系，结果显示:在8~64μg/mL剂量时，蜂毒肽的抑瘤率直线上升，在体外表现***的抗瘤效果。 蜂毒是蜜蜂蛰刺时排出的毒液，因价格昂贵且产量稀缺而被誉为“液体黄金”。

2001年，黄雪强等通过人白血病细胞观察蜂毒肽促凋亡的作用，结果发现对白血病细胞5mg/mL蜂毒肽作用4h与4μg/mL蜂毒肽作用24h都可见典型凋亡特征，进一步实验发现其诱导细胞凋亡同bcl-2基因表达***下降相关。

王秋波等通过人工合成含特异性酶切位点的AB两条寡核苦酸片段，在Klenow酶作用下形成目的基因，用限制型内切酶HindⅢ，XmnⅠ同时酶切目的基因和表达载体Pmal-p2质粒，在T4连接酶的作用下构建两者的重组体，通过α-互补筛选出附性克隆，并通过特异性酶切和测序分析进行鉴定，获得重组蜂毒肽的原核表达克隆。 蜂毒肽更是迄今人类所知***活性**强的物质，其***活性是氢化可的松的100倍。**蜂毒成交价

蜂毒中富含蜂毒肽和蜂毒明肽等天然***物质。**蜂毒共同合作

我国天然蜂毒主要采自意大利蜜蜂(Apis melliferaligustica),天然蜂毒是具有苦香气味的透明液体，在室温下很快就干燥至原来重量的30%~40%。蜂毒是一种成分十分复杂的混合物，经过各国学者几十年的研究，已知蜂毒含有多种生物活性物质，如蜂毒肽(melittin)、蜂毒明肽(apamin)、MCD肽(mast cell deganulatingpeptide)等。蜂毒肽是蜂毒的主成分，其重量占蜂毒干物质45%~50%。蜂毒肽具有很高的生物学作用和药理作用，其半数致死量(LD50)为4.0mg/kg，现代药理研究表明蜂毒肽具有***、镇痛、***血小板凝聚和抗**等作用。**蜂毒共同合作

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