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  • 甘肃单色染色步骤,染色
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染色基本参数
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  • 扬克斯
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  • 适宜人群
  • 动物
  • 不适宜人群
  • 动物
  • 保质期
  • 3个月
染色企业商机

HE染色原理(1)易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia);而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。

构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为ph6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,ph值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;ph值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的ph值可以影响染色的反应。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色。甘肃单色染色步骤

细菌染色剂配方一、齐氏(Zieh1)石炭酸品红染液

甲液:取石炭酸5克,溶解在95毫升蒸馏水中。

乙液:取03克碱性品红,放入研钵中研磨,逐渐加入10毫升95%酒精,继续淹役,使它溶解。

将甲液和乙液混合后,摇匀,过滤,装瓶,备用。

配方二、罗氏(loffler's)美蓝染液

甲液:取S克美蓝,溶于100毫升95%6酒精中,制成美蓝一酒精饱和液。

乙液:取氢氧化钾0.01克(或1%氢氧化钾溶液1毫升),溶液也可用于放线菌染色,0.1%浓度可用于酵母菌染色。

配方三、革兰氏(Gram's)染液

用此液染色因先用甲液染色,再加乙液固定,丙液处理,***用丁液复染。四种液体的配方如下:

甲液:结晶紫液

(1)结晶紫2克95%酒精20升

(2)草酸铵0.8克蒸馏水80毫升

使用前将(1)、(2)液轻摇混匀,静置48小时后使用。

乙液:碘液

碘1克碘化钾2克蒸馏水300毫升

将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘,待碘全部溶解后,加水稀释至300毫升。

丙液:95%酒精溶液

丁液:番红花红液

2.5%番红花红酒精溶液10毫升蒸馏水100毫升。 昆明masson染色切片高碘酸无色品红法:将脂褐素染色;脂褐素呈深紫色颗粒,粘液也呈深紫色。

    甲基绿派洛宁法:1、试剂配制:(1)2%甲基绿水溶液:甲基绿(methylgreen)1g蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提,方法详后。(2)5%派洛宁水溶液:派洛宁G(pyronineG)1g蒸馏水加至20ml(3)醋酸盐缓冲液(pH)醋酸液41ml醋酸钠液59ml(4)甲基绿派洛宁染液:2%甲基绿水溶液(经抽提)5ml5%派洛宁水溶液1ml蒸馏水12ml醋酸盐缓冲液(pH)18ml2、操作步骤:(1)新鲜组织固定于Carnoy氏液(4℃)3~6小时,经95%酒精和无水酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。(2)切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。(3)置入甲基绿派洛宁染液于室温染30~60分钟。(4)取出切片,不经水洗,用滤纸吸干多余染液。(5)用**迅速分化。(6)转入**二甲苯(1:1)稍洗。(7)二甲苯透明2~3次。(8)中性树胶封固。结果:存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色,胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。3、对照方法:(1)取另一连续切片用核糖核酸酶1mg/1ml于37℃温箱内消化3小时,蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。(2)切片在10%高氯酸于4℃处理12~18小时,水洗后用1%碳酸钠液中和2分钟,流水冲洗5分钟,再用蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。经上述方法之一处理后的切片就为阴性。

实验室常用人工染料(3)苏丹II:

苏丹II是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。 苏丹I是脂肪染色剂。

伊红:

这类染料种类很多。常用的伊红Y,是酸性染料,呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状,溶于水(15摄氏度是溶解度达44%)和酒精(溶于无水酒精的溶解度为2%)。伊红在动物制片中广泛应用,是很好的细胞质染料,常用作苏木精的衬染剂。

碱性品(复)红:

碱性品红是碱性染料,呈暗红色粉末或结晶状,能溶于水(溶解度1%)和酒精(溶解度8%)。碱性品红在生物学制片中用途很广,可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和***组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁,又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中,长用来鉴别结核杆菌。在尔根氏反应中用作组织化学试剂,已核查脱氧核糖核酸。 美蓝染料***染色时,由于活细胞代谢过程中的脱氢作用,美蓝接受H后就由氧化转变为还原态,故表现出无色。

在切片染色到封片之前的过程中,乙醇是一个特别常用的脱水脱二甲苯的试剂。在二甲苯中脱蜡不完全的切片组织进入到乙醇中能看到明显的蜡渣沉积会对试剂造成污染,也会影响***制成切片的效果,在操作过程中要特别注意。

二甲苯可以洗去切片组织上的蜡,蜡块是将组织包块后进行切片的必要物质;二甲苯也作为切片染色流程全部完成后,帮助透明让染色图像更加清晰的试剂。

染液的作用:让切片充分的着色,不同的染色方法所使用到的染液和染色时间也各不相同,一般按照自己对实验目的的需要来选用比较好的染色方法或多重染色方法。 中文名:PAS染色法,外文名:Periodic Acid-Schiff stain,主要用来:检测组织中的糖类。学科/领域:组织学。福建天狼星红染色结果

苯酚碱性品红法:使抗酸杆菌的糖脂蜡质与碱性品红结合形成复合物,从而使抗酸杆菌呈红色。甘肃单色染色步骤

    Masson染色法试剂:Regaud氏苏木精:苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用Masson丽春红酸性复红液:丽春红,酸性复红,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml:冰醋酸ml,蒸馏水100ml1%磷钼酸水溶液:磷钼酸1g,蒸馏水100ml苯胺蓝水溶液:苯胺蓝2g,蒸馏水98ml,冰醋酸2ml1%光绿水溶液:光绿1g,蒸馏水100ml步骤:1.石蜡切片脱蜡至水2.铬化处理或去汞盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)3.依次自来水和蒸馏水洗4.用Regaud苏木精染液或Weigert苏木**染核5-10min5.充分水洗,如过染可盐酸酒精分化6.蒸馏水洗7.用Masson丽春红酸性复红液5-10min8.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻9.1%磷钼酸水溶液分化3-5min10.不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min11.以12.95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色。注意事项:1.组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间2.磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制,肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可。 甘肃单色染色步骤

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