HE染色原理（2）脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。甲苯胺蓝法：将肥大细胞染色；肥大细胞紫红色，背景呈蓝色。成都番红固绿染色评价
显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的试剂配制：
(1)高锰酸钾硫酸液高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。
(2)维多利亚蓝染色液维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g；蒸馏水200ml。
将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min,不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60℃恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。
(3)丽春红染色S染色液
丽春红S水溶液15ml，苦味酸饱和水溶液85ml。
(4)Gomori氨性银改良液取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑色变清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。***用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。 贵阳荧光染色质量罗丹明染色法：铜沉积物-砖红色，核-蓝色，胆汁-绿色。
席夫(Schiff's)试剂：
称取0.5克碱性品红，加到100 毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热5分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重(亚硫酸钠)或无(水亚硫酸氢钠)。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时，加入0.5克活性炭，用力摇荡1分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光(瓶外用黑纸或暗盒遮光)。
如溶液变成红色，即失去染色能力。碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏(Feulgen's)反应中作为组织化学试剂，以检查DNA。
四川扬克斯特为您介绍多色染色法示例：
（1）一、Mallory三色染色法（染结缔组织）
1.试剂配制
(1)重铬酸钾液
重铬酸钾2.5g;醋酸5m1，蒸馏水95ml
(2)苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100m1
(3)酸性复红液酸性复红0.5g，蒸馏水100ml
2.染色步骤
(1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
(2)重铬酸钾液10mino
(3)蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。
(4)酸性复红液2min,蒸馏稍洗。
(5)苯胺蓝液20min,95%乙醇快速分化。
(6)直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果
胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色:神经胶质纤维、
肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项
(1)酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。
(2)苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。
(3)对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。
(4)另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。 苦味酸-酸性品红法 胶原纤维，肌纤维、细胞质双重染色；胶原纤维红色，肌纤维和红细胞黄色，细胞核蓝褐色。
甲苯胺蓝染色法 ：1. 甲苯胺蓝液
甲苯胺蓝0.5g蒸馏水定容至100ml
2. 冰醋酸液
冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml
染色步骤：
1.组织切片常规脱蜡至水
2.入甲苯胺蓝液30min
3.稍水洗
4.入冰醋酸液分化，直到胞核和颗粒清晰。
5.稍水洗，用冷风吹干
6.二甲苯透明，中性树胶封固
(二)
①切片脱腊至水。
②蒸馏水浸洗3次。
⑤0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。
④水洗，洗去多余染液。
⑤各级酒精脱水。
⑥二甲苯透明，中性树胶封固。
试剂的配制
称取0.1g甲苯胺蓝，溶于100ml 0.1M 醋酸盐缓冲液中，置室温5天后，即可使用染液于室温下可保存3个月，若放于4℃水箱则可保存半年左右，但该液的染色效果在早期为比较好，若染液存放时间较长，则染色偏淡，应适应延长染色时间。 维多利亚蓝法：将HBsAg阳性，细胞核双重染色；HBsAg阳性呈蓝绿色，细胞核红色。上海阿利新蓝染色方法
高碘酸复红法：将***和红细胞双重染色；***紫红色，红细胞浅黄色。成都番红固绿染色评价
常规HE染色步骤:
A.二甲苯（Ⅰ）15min
B.二甲苯（Ⅱ）15min
C.二甲苯：无水乙醇=1:12min
D.100%乙醇（Ⅰ）5min
E.100%乙醇（Ⅱ）5min
F.80%乙醇5min
G.蒸馏水5min
H.苏木**染色5min
I.水洗10min或流水冲洗5min
J.1%盐酸乙醇30s
K.水洗30s
L.蒸馏水过洗5s
M.0.5%伊红液染色1-3min
N.蒸馏水稍洗30s
O.80%乙醇稍洗30s
P.95%乙醇（Ⅰ）1min
Q.95%乙醇（Ⅱ）1min
R.无水乙醇（Ⅰ）3min
S.无水乙醇（Ⅱ）3min
T.二甲苯（Ⅰ）3min
U.二甲苯（Ⅱ）3min
V.中性树胶封固 成都番红固绿染色评价
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