四川扬克斯特科技为您介绍HE染色法:苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining),简称HE染色法,石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性,伊红为酸性染料。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中**基本、使用*****的技术方法。
相关染液:苏木素,伊红
常用测量:面积测量,肠绒毛测量
病理诊断:病理描述,病理评分
染色效果:主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色,细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 美蓝染色法:美蓝是常用的***染色染料,当它处于氧化状态是呈现出蓝色,而还原态时为无色。四川番红固绿染色上机
HE染色的试剂与仪器A:0.5~1%的伊红酒精溶液:
称取伊红Y0.5~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可)100毫升溶解。
B:苏木素染液配方:(配制3000ml,可按比列减少)
苏木精6g
无水乙醇100ml
硫酸铝钾150g
蒸馏水2000ml
碘酸钠1.2g
冰醋酸120ml
甘油900ml
配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,***加入冰醋酸和碘酸钠。
C:1%盐酸酒精分化液:将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。 北京单色染色上机Lendrum MSB法:将纤维蛋白,细胞核,红细胞多重染色;纤维蛋白红色,陈旧纤维蛋白紫色,细胞核蓝色。
显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的染色步骤:
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(2)高锰酸钾硫酸液氧化3min后,自来水浸洗后,用2%草酸漂白2min.
(3)5%硫酸铁铵1min.
(4)Gomori氨性银改良液染1min.
(5)蒸馏水洗2次,用15%甲醛液还原1min.
(6)蒸馏水洗2次,氯化金30s,蒸馏水洗1次。
(7)70%乙醇浸一次,再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h.
(8)95%乙醇分化1min左右。
(9)浸入蒸馏水中1min后,用丽春红S染色液染色2min.
(10)直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈红色,网状纤维呈黑色,弹力纤维呈绿色,肌肉和红细胞呈淡黄色。
4.注意事项
氨性银液滴染时,要用干净吸管,防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒,应将蒸馏水冲洗切片上的银液,这样就不会使银液表面的银挥发.
颗粒而沉积在组织上。
植物相关常用染色方法(1):(1)淀粉类:淀粉是植物的主要贮藏物质,它们在各种不同的植物细胞中形成各种形状小同的颗粒。由于碘与淀粉作用可形成碘化淀粉而呈蓝色反应,用碘-碘化钾溶液来测试淀粉粒已成为**常用的方法。
(2)蛋白质类:植物细胞中的蛋白质是构成原生质体的主要成分,也可成为后含物贮存于细胞内,可能是无定形的,也可能成为结晶体或成为糊粉粒。
①较普遍的方法是用碘化钾染色,显微镜下观察可看到被染成黄色的圆球状小颗粒,即为储藏蛋白质的糊粉粒。
②**-溴酚蓝法是检测糊粉粒的**普通方法:在切片上滴加**-溴酚蓝试剂(**10g,溴酚蓝1mg,蒸馏水100ml)1滴,过5分钟后,用0.5%的醋酸冲洗,除去切片上多余的染料,再放在培养皿中水洗5分后用甘油封藏,细胞中如有糊粉粒则被染成鲜蓝色。
③曙红-酒精-苦味酸法也是显示糊粉粒的较好方法:在切片上滴上曙红-酒精-苦味酸试剂(配方曙红1g,溶于苦味酸的95%酒精饱和溶液50ml),镜检,当糊粉粒的基质现出蓝色时,加上数滴纯酒精,此时糊粉粒中球蛋白无色而结晶现出黄绿色,吸去多余酒精,用丁香油透明,加拿大树胶封固,**终蛋白质结晶应为黄色,球蛋白为粉红色,基质为暗红色。 粘液胭脂红法:将粘液和细胞核染色;粘液深玫瑰色,核黑色,其他成分黄色。
弹力纤维染色:弹力纤维是结缔组织发生形成较晚的一种纤维,在创伤修复中一般在4—5周才有较明显的弹力纤维形成。弹力纤维艰固、较小而弹性较大,容易伸展,在结缔组织起弹性作用。弹力纤维由弹性蛋白组成,新鲜时呈黄色又称黄纤维。弹力纤维纤维分枝连成网,折光性强,含量多时在HE染片上呈折光性强的粉红色,量少的不显色。故量多时与胶原纤维不易区别,量少则不能观察。弹力纤维染色主要用于观察弹力纤维有无增生、肿胀、断裂、破碎及萎缩或缺如等病变。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中**基本、使用*****的技术方法。湖南PAS染色试剂
普鲁士蓝法 反应显示三价铁染色结果:含铁血黄素蓝色,其他浅红色。四川番红固绿染色上机
植物相关常用染色方法(2):油脂:在植物解剖学研究中,常用苏丹Ⅲ(或苏丹 IV) 溶液对脂肪性物质进行染色切片浸入上述溶液中 24h, 然后用 50% 的酒精洗涤,加上甘油后观察,油脂可被染成淡黄至红色,栓质和角质也同样被染色。如果细胞中存在硬脂或脂肪酸结晶时,染色十分缓慢,可稍加热。
单宁:单宁的化学结构比较复杂,它是一种多元酚的衍生物,大多呈胶体状态,存在于植物细胞的液泡中,或形成单独的液泡。将切片浸人 10% 的氯化铁水溶液中(或加-些碳酸钠),单宁物质则被染成蓝绿色。
橡胶:天然橡胶是异戊二烯的聚合物,植物组织中所含橡胶物质大多存在千乳汁管中,也有的存在于液泡中。对存在于乳汁管中的橡胶成分,可以用苏丹Ⅲ溶液染色材料应先用 10%铬酸 +70%酒精(使用前配制)固定 24h, 以使橡胶凝固,用刀片切去1-2mm, 而后徒手切片,于载玻片上加上苏丹Ⅲ或苏丹 Ⅳ溶液染色,乳汁管中的橡胶类物质被染成红色。 四川番红固绿染色上机
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