5'DNA腺苷酰化试剂盒中使用的酶通常被称为腺苷酰化酶(Adenylase),这种酶能够催化5'端磷酸化的单链DNA或RNA(pDNA或pRNA)转换成5'端腺苷酰化DNA或RNA(AppDNA或AppRNA)。根据搜索结果,该酶的来源是嗜热古细菌,在大肠杆菌中进行表达并纯化而获得。这种酶在反应中将ATP分解成AMP和PPi,然后将AMP转移到单链DNA的5'磷酸基团上,形成腺苷酰化单链DNA,从而制备出腺苷酰化接头(linker)。此外,一些5'DNA腺苷酰化试剂盒中使用的酶是MthRNA连接酶(例如NEB#M2611A),这种酶也用于生成高产量的5'腺苷酰化DNA,并且操作简便,具有超过95%的效率,无需凝胶纯化即可完成单步反应。MthRNA连接酶是一种已知能够在65℃下有效工作的酶,有助于避免DNA的二级结构对腺苷酰化反应的干扰。这些酶的高效率和特异性使得5'DNA腺苷酰化试剂盒在单链DNA的5'端腺苷酰化修饰中非常有效,常用于miRNA等3'端为羟基的RNA或单链DNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等应用中。泛素化可以是单泛素化,也可以是多泛素化或多聚泛素化,这取决于靶蛋白上连接的泛素分子的数量和方式。Recombinant Human Fas/TNFRSF6/CD95 (hFc Tag)
T4UvsX重组酶在生产时由大肠杆菌表达和纯化,指的是利用分子生物学技术将T4UvsX重组酶的基因克隆到大肠杆菌(Escherichiacoli)中,然后通过大肠杆菌的生物合成机制来生产这种酶。具体过程如下:1.**基因克隆**:首先,科学家们会从T4噬菌体中分离出编码T4UvsX重组酶的基因。2.**载体构建**:将这个基因插入到一个质粒(一种小型、圆形的DNA分子)中,这个质粒可以作为载体,将目标基因导入大肠杆菌。3.**转化**:将含有T4UvsX基因的质粒转化到大肠杆菌细胞中。转化是指将外源DNA引入到细胞内的过程。4.**表达**:一旦质粒进入大肠杆菌细胞,它将开始表达T4UvsX基因,即利用大肠杆菌的核糖体和其他细胞机制来合成T4UvsX重组酶的蛋白质。5.**培养**:将转化后的大肠杆菌在适宜的培养基中培养,使其繁殖,从而增加T4UvsX重组酶的产量。6.**纯化**:培养一段时间后,收集大肠杆菌细胞,通过一系列生化方法(如离心、过滤、层析等)从细胞裂解物中提取并纯化T4UvsX重组酶。Recombinant Human 4-1BB Receptor/TNFRSF9由于其高活性,pA-Tn5转座酶允许从极少量的细胞中进行实验,如单细胞水平的研究。
核酸(DNA和RNA)的可视化是分子生物学实验中的一项基本技术,用于检测和分析核酸的存在、大小、数量和纯度。以下是几种常用的核酸可视化方法:1.**紫外线(UV)检测**:-利用核酸分子对UV光的吸收特性,特别是在260nm波长下的吸收峰。-常用的UV检测方法包括凝胶电泳后的凝胶成像系统,可以观察到凝胶中DNA或RNA的条带。2.**荧光染料染色**:-使用荧光染料,如溴化乙锭(EthidiumBromide,EB)或SYBRGreen,这些染料可以与核酸结合并在特定波长的光照射下发出荧光。-EB常用于凝胶电泳后的DNA可视化,而SYBRGreen可用于实时定量PCR(qPCR)中DNA的检测。3.**凝胶电泳**:-通过将核酸样品加载到凝胶中,利用电场驱动核酸分子按大小分离,然后通过上述的UV或荧光染料进行可视化。4.**紫外交联**:-某些荧光染料,如BODIPY或Cy5,可以通过紫外交联直接结合到核酸上,提供更高的灵敏度和特异性。5.**银染**:-一种比EB染色更灵敏的染色方法,通过银离子与核酸的结合,然后还原成金属银,形成可见的黑色或棕色条带。6.**化学发光检测**:-使用特定的化学发光底物,如荧光素或鲁米诺,与核酸结合后,在氧化过程中产生光信号。
磁珠本身并不直接参与电泳过程,但它们可以用于电泳后的样品处理,特别是在核酸(DNA或RNA)的提取和纯化过程中。以下是使用磁珠进行电泳后样品处理的一般步骤:1.**凝胶电泳**:-首先,将DNA或RNA样品通过凝胶电泳进行分离。凝胶通常是琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶,根据样品的大小和类型选择合适的凝胶浓度和缓冲体系。2.**观察和切割**:-电泳完成后,使用紫外线照射凝胶并使用适当的染料(如EB或SYBRGreen)对DNA或RNA进行染色,以在紫外光下观察到DNA或RNA的条带。3.**样品提取**:-确定目标DNA或RNA条带后,使用干净的工具(如切割器或移液枪)从凝胶中切割出含有目标分子的凝胶片段。4.**磁珠准备**:-根据磁珠试剂盒的说明书,准备磁珠。通常包括磁珠的重悬和可能的表面修饰,以确保它们能够特异性地结合目标核酸。5.**样品与磁珠混合**:-将切割出的凝胶片段转移到含有磁珠的溶液中,温和地混合以促进磁珠与核酸的结合。6.**磁分离**:-将含有磁珠和核酸的混合物置于磁分离架上,利用磁场使磁珠快速聚集在管底,从而实现与溶液的分离。7.**洗涤**:-移除未结合的溶液,向磁珠上加入洗涤液,再次进行磁分离以去除杂质。分子胶降解剂通过诱导不同的Ub连接酶与目标蛋白之间的相互作用来促进目标蛋白的降解。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一种用于合成互补DNA(cDNA)的试剂盒,它通过逆转录过程从信使RNA(mRNA)或总RNA模板合成cDNA的链。这类试剂盒通常包含逆转录酶(ReverseTranscriptase,RT)和其他必要的组分,以确保高效和准确的cDNA合成。RNaseH-表示该试剂盒使用的逆转录酶缺乏RNaseH活性,这意味着在合成cDNA链的过程中不会发生RNA的降解,从而可以产生更高产量的全长cDNA,特别是从较长的模板(可达13kb)。该试剂盒通常包括以下组分:-逆转录酶,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通过点突变完全消除了RNaseH活性。-RiboLockRNaseInhibitor,这是一种重组蛋白,可有效保护RNA在高达55°C的温度下不受RNases的降解。-缓冲液、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他辅助成分,以支持cDNA合成反应。-有时还包括用于去除RNA样品中污染的基因组DNA的DNaseI。合成的cDNA可以作为PCR或实时PCR的模板直接使用,也适用于第二链cDNA合成或线性RNA放大。此外,可以在cDNA合成过程中加入放射性或非放射性标记的核苷酸,以便在包括微阵列在内的杂交实验中作为探针使用。泛素化是一种蛋白质翻译后修饰过程,涉及将泛素分子共价结合到靶蛋白上。这个过程由一系列酶促反应组成。Recombinant Human CD163 Protein,His-Avi Tag
SpCas9-NLS的应用范围广泛,可用于细胞内的CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑。Recombinant Human Fas/TNFRSF6/CD95 (hFc Tag)
Blood Direct PCR Master Mix (2×)的组分通常包括以下几类:高保真DNA聚合酶:例如,NEB的Q5 Blood Direct 2X Master Mix中包含的Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase,这是一种热稳定性DNA聚合酶,具有3'→5'核酸外切酶活性,并与Sso7d结构域融合以增强过程性3940。dNTPs:提供DNA合成所需的四种脱氧核苷三磷酸。优化的缓冲体系:包含适合于血液样本PCR扩增的pH和离子强度,以及能够抵抗血液样本中抑制剂的特殊成分。稳定剂:保证预混合溶液在储存和使用过程中的稳定性。抗抑制剂成分:一些Blood Direct PCR Master Mix含有能够抵抗血液样本中可能存在的PCR抑制剂的成分。可选的染料:某些产品可能含有用于电泳的染料,允许PCR产物直接上样进行电泳分析,无需额外的上样缓冲液。其他可选组分:根据需要,可能包括MgCl2、EDTA、DMSO等,用于优化特定样本或反应条件42。Recombinant Human Fas/TNFRSF6/CD95 (hFc Tag)
大肠杆菌表达的重组抑肽酶(Aprotinin)是一种通过基因工程技术在大肠杆菌中生产的蛋白酶抑制剂,具有以下特性和应用:1.**来源**:重组抑肽酶是通过大肠杆菌(E.coli)表达系统生产的,确保了无动物源性成分,减少了病毒污染的风险。2.**结构**:它是一种单体球状蛋白,由58个氨基酸组成,具有三个交联二硫键的单个多肽链。3.**功能**:作为一种竞争性、可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,重组抑肽酶能够抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、激肽释放酶和血纤维蛋白溶酶等的活性。4.**应用**:在生物技术过程中,重组抑肽酶可以替代动物源性抑肽酶,用于重组蛋白生产中抑制丝氨酸蛋白酶的活性,以及在细胞培养等过程中。...