北京荧光染色步骤

实验室常用人工染料：（1）人工染料：即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它们的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。

1、酸性品红

酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精(0.3%)。 他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。

组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。

2、刚果红

刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。 Gram碱性复红结晶紫法将革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌双重染色；革兰阳性细菌蓝色，阴性红色，细胞核红色。北京荧光染色步骤

实验室常用天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用**浸制出来的一种色素，是**常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液(如盐酸-酒精)分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。 湖北甲苯胺蓝染色质量地依红染色法：将弹力纤维、结缔组织，细胞核双重染色；弹力纤维呈深棕色，结缔组织浅棕色，细胞核蓝色。

染色体染色剂：配方一、醋酸-洋红染液

取45ml冰醋酸，加蒸馏水55ml，煮沸后徐徐加入洋红1g，搅拌均匀后加入1颗铁锈钉，煮沸10min，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。

配方二、醋酸-地衣红染液

取45ml醋酸，跟55ml蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末1~2g，搅拌溶解后，缓缓煮沸2小时，冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。

配方三、龙胆紫染液

取1g龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100ml，保存在棕色瓶内。

配方四、甲苯胺蓝染液

取0.5g甲苯胺蓝，溶解在100ml蒸馏水中，即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。

四川扬克斯特科技为您介绍HE染色法：苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，伊红为酸性染料。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中**基本、使用*****的技术方法。

相关染液：苏木素，伊红

常用测量：面积测量，肠绒毛测量

病理诊断：病理描述，病理评分

染色效果：主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色，细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 甲基紫染色法：将淀粉样物，细胞核双重染色；淀粉样物红色或紫红色。细胞核蓝色。

    Masson染色法试剂：Regaud氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用Masson丽春红酸性复红液：丽春红，酸性复红，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml：冰醋酸ml，蒸馏水100ml1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100ml苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98ml，冰醋酸2ml1%光绿水溶液：光绿1g，蒸馏水100ml步骤：1．石蜡切片脱蜡至水2．铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）3．依次自来水和蒸馏水洗4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木**染核5-10min5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化6．蒸馏水洗7．用Masson丽春红酸性复红液5-10min8．2%冰醋酸水溶液浸洗片刻9．1%磷钼酸水溶液分化3-5min10．不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min11．以12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色（如光绿液染色为绿色），胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。注意事项：1．组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间2．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制，肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。 LiLLie亚铁反应法：将黑色素，肌纤维双重染色；黑色素暗绿色，背景浅绿或不着色，肌纤维和背景黄色。浙江双色染色试剂

PAS染色原理：过碘酸能使细胞内多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液无色品红结合呈红色定位于胞浆上。北京荧光染色步骤

冷冻切片HE染色步骤:（1）冰冻切片固定10～30s

（2）稍水洗1～2s

（3）苏木**染色（60℃）30～60s

（4）流水洗去苏木**5～10s

（5）1%盐酸乙醇1～3s

（6）稍水洗1～2s

（7）促蓝液返蓝5～10s

（8）流水冲洗15～30s

（9）0.5%曙红液染色30～60s

（10）蒸馏水稍洗1～2s

（11）80%乙醇1～2s

（12）95%乙醇1～2s

（13）无水乙醇1～2s

（14）石炭酸二甲苯2～3s

（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s

（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s

（17）中性树胶封固

注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。

注意事项：

切片脱水透明，切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。 北京荧光染色步骤

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