常规HE染色步骤:
A.二甲苯（Ⅰ）15min
B.二甲苯（Ⅱ）15min
C.二甲苯：无水乙醇=1:12min
D.100%乙醇（Ⅰ）5min
E.100%乙醇（Ⅱ）5min
F.80%乙醇5min
G.蒸馏水5min
H.苏木**染色5min
I.水洗10min或流水冲洗5min
J.1%盐酸乙醇30s
K.水洗30s
L.蒸馏水过洗5s
M.0.5%伊红液染色1-3min
N.蒸馏水稍洗30s
O.80%乙醇稍洗30s
P.95%乙醇（Ⅰ）1min
Q.95%乙醇（Ⅱ）1min
R.无水乙醇（Ⅰ）3min
S.无水乙醇（Ⅱ）3min
T.二甲苯（Ⅰ）3min
U.二甲苯（Ⅱ）3min
V.中性树胶封固 苏丹Ⅲ染色法：将脂肪和细胞核染色，遇脂肪变橘黄色，细胞核呈蓝色。上海单色染色原理
色素染色（含铁血黄素及黑色素）：
含铁血黄素是由漏出于血管外的红细胞，被巨噬细胞吞噬后，分解血红蛋白产生的颗粒，HE染色为棕黄色，故称为含铁血黄素。因有时与福尔马林沉渣及黑色素等难相区别，故做含铁血黄素染色。
应用：
主要用于同其它色素鉴别，若为阳性，显示陈旧性出血。黑色素常见于皮肤色素细胞，恶性黑色素瘤常可产生黑色素。组织内大量存在时呈棕黑色，易于鉴别。但少量存在时便难与其它色素相鉴别，须作黑色素染色。
黑色素瘤的诊断与鉴别诊断：**细胞内色素是否为黑色素，染黑色素有助于确定黑色素性质及**的定性诊断。
血色病与黑便病：皮革内有色素沉着，黑色素阴性而含铁血黄素阳性者可能为前者。 江西甲苯胺蓝染色结果苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色。
Masson染色法试剂：Regaud氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用Masson丽春红酸性复红液：丽春红，酸性复红，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml：冰醋酸ml，蒸馏水100ml1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100ml苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98ml，冰醋酸2ml1%光绿水溶液：光绿1g，蒸馏水100ml步骤：1．石蜡切片脱蜡至水2．铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）3．依次自来水和蒸馏水洗4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木**染核5-10min5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化6．蒸馏水洗7．用Masson丽春红酸性复红液5-10min8．2%冰醋酸水溶液浸洗片刻9．1%磷钼酸水溶液分化3-5min10．不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min11．以12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色（如光绿液染色为绿色），胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。注意事项：1．组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间2．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制，肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。
HE染色原理（2）脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。银氨染色法：将网状纤维，胶原纤维双重染色；网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈黄色。
多色染色法示例：Masson三色染色法
1.试剂配制
(1)Masson复合染色液
酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，醋酸300ml。
(2)亮绿染色液高绿SF0.1g，醋酸100ml。
2.染色步骤
中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
(1)Masson复合染色液5min。
(2)醋酸水溶液稍洗。
(3)5%磷钨酸5-10min。
(4)醋酸水溶液浸洗2次。
(5)亮绿染色液5min,醋酸水洗2次。
(6)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。
4.注意事项
(1)Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
(2)亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。 甲醇刚果红法：将淀粉样物，细胞核双重染色；淀粉样物紫红色，细胞核蓝色。湖南甲苯胺蓝染色方法
高碘酸无色品红法：将脂褐素染色；脂褐素呈深紫色颗粒，粘液也呈深紫色。上海单色染色原理
胶原纤维染色：凡是间叶组织细胞都可产生网织纤维，也可产生胶原纤维，纤维母细胞是产生胶原纤维的主要细胞。胶原纤维是结缔组织中的主要纤维，是结缔组织中起支持作用的重要部分，具有一定的韧性和坚固性，能抵抗一定的牵引力而不致撕裂。胶原纤维是原胶原互相错开1/4平行排列交联成胶原原纤维，胶原原纤维再聚合成较宽的结构。按胶原的化学成分可分为15种，间质中的胶原纤维主要由I、Ⅱ、Ⅲ型胶原组成，新鲜时呈白色，故又称为白纤维。在HE染色中呈均一的粉红色，与周围间质区分不是很清楚。染色后，便可明显区别开来，易于观察病变时胶原纤维的变化。
应用：
（1）***硬化性疾病的观察：如肝硬变、心肌瘢痕的观察，胶原染色更易于观察诊断。
（2）瘢痕与淀粉样物质鉴别：前者胶原纤维染色为阳性，后者为阴性。
（3）骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别：利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱，纵横交错，后者较规则。 上海单色染色原理
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