山东甲苯胺蓝染色试剂

HE染色的试剂与仪器A：0.5~1%的伊红酒精溶液：

称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。

B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)

苏木精6g

无水乙醇100ml

硫酸铝钾150g

蒸馏水2000ml

碘酸钠1.2g

冰醋酸120ml

甘油900ml

配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，***加入冰醋酸和碘酸钠。

C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。 维多利亚蓝法：将HBsAg阳性，细胞核双重染色；HBsAg阳性呈蓝绿色，细胞核红色。山东甲苯胺蓝染色试剂

HE染色原理（1）易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性（basophilia）和嗜酸性（acidophilia）；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性（neutrophilia）。

构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为ph6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，ph值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；ph值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的ph值可以影响染色的反应。昆明多色染色效果衰老的细胞由于代谢缓慢或停止，不能使美蓝还原，所以呈蓝色或者淡蓝色。

冷冻切片HE染色步骤:（1）冰冻切片固定10～30s

（2）稍水洗1～2s

（3）苏木**染色（60℃）30～60s

（4）流水洗去苏木**5～10s

（5）1%盐酸乙醇1～3s

（6）稍水洗1～2s

（7）促蓝液返蓝5～10s

（8）流水冲洗15～30s

（9）0.5%曙红液染色30～60s

（10）蒸馏水稍洗1～2s

（11）80%乙醇1～2s

（12）95%乙醇1～2s

（13）无水乙醇1～2s

（14）石炭酸二甲苯2～3s

（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s

（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s

（17）中性树胶封固

注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。

注意事项：

切片脱水透明，切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。

吸虫染色剂

梅耶氏(Mayer' s )明矾-洋红染液

取铵明矾(硫酸铝铵) 5克，溶于95毫升蒸馏水中，再加入0.5克洋红酸，加热溶解，冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂，如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚(石炭酸)等，以防生霉。

这种染液适合于染小型动物材料，如吸虫等寄生虫的整体，也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。

***染色剂

配方一、中性红染液.

先配成1%中性红水溶液(1克中性红溶于100毫升蒸馏水中)。取这种溶液1毫升，用0.6%生理盐水(或蒸馏水)稀释到50毫升，即成0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗处。

本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。

配方二、尼罗蓝(Nile Blue)染液

取0.1克尼罗蓝，溶解于1000~1500毫升蒸馏水中，即成尼罗蓝染液。

这种染液能把原生动物大核染成绿色，食物泡染成蓝色。

配方三、亚甲蓝染液

取0.1克亚甲蓝，溶解于1000毫升蒸馏水中，即成亚甲蓝染液。

这种染液用于原生动物的***染色。 PAS染色原理：过碘酸能使细胞内多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液无色品红结合呈红色定位于胞浆上。

染色体染色剂：配方一、醋酸-洋红染液

取45ml冰醋酸，加蒸馏水55ml，煮沸后徐徐加入洋红1g，搅拌均匀后加入1颗铁锈钉，煮沸10min，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。

配方二、醋酸-地衣红染液

取45ml醋酸，跟55ml蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末1~2g，搅拌溶解后，缓缓煮沸2小时，冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。

配方三、龙胆紫染液

取1g龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100ml，保存在棕色瓶内。

配方四、甲苯胺蓝染液

取0.5g甲苯胺蓝，溶解在100ml蒸馏水中，即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。 甲醇刚果红法：将淀粉样物，细胞核双重染色；淀粉样物紫红色，细胞核蓝色。吉林HE染色切片

美蓝染色法：美蓝是常用的***染色染料，当它处于氧化状态是呈现出蓝色，而还原态时为无色。山东甲苯胺蓝染色试剂

天狼星红的染色法原理是什么？

原理利用胶原分子与强酸性染料天狼星红结合一起后加强双折光现象，使不同颜色和形态的胶原纤维得以区分。

胶原纤维（collagenousfiber）在三种纤维中数量**多，新鲜时呈白色，有光泽，故又名白纤维。在HE染色切片中呈嗜酸性，粗细不等，直径0.5~10um，呈波浪形，有分支并交织呈网，胶原纤维的生化成分为I型胶原蛋白。

胶原蛋白（collagen）由纤维细胞分泌，于细胞外聚合成胶原原纤维，经少量黏合成胶原纤维。胶原纤维是三种纤维中分布*****的一种纤维，***分布于各脏器内，它在皮肤、巩膜和肌腱**为丰富。

胶原纤维在上述的两种方法中着染不同的颜色，如V.G着染红色，Masson氏着染蓝色或绿色。

这主要取决于染料对组织的渗透、吸附、沉淀和反应，而染料分子量的大小是关键，分子量小的分子移动迅速，行动快，对组织的渗透性较强，能穿透较为致密的组织。 山东甲苯胺蓝染色试剂

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