显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的染色步骤:
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(2)高锰酸钾硫酸液氧化3min后,自来水浸洗后,用2%草酸漂白2min.
(3)5%硫酸铁铵1min.
(4)Gomori氨性银改良液染1min.
(5)蒸馏水洗2次,用15%甲醛液还原1min.
(6)蒸馏水洗2次,氯化金30s,蒸馏水洗1次。
(7)70%乙醇浸一次,再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h.
(8)95%乙醇分化1min左右。
(9)浸入蒸馏水中1min后,用丽春红S染色液染色2min.
(10)直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈红色,网状纤维呈黑色,弹力纤维呈绿色,肌肉和红细胞呈淡黄色。
4.注意事项
氨性银液滴染时,要用干净吸管,防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒,应将蒸馏水冲洗切片上的银液,这样就不会使银液表面的银挥发.
颗粒而沉积在组织上。 中文名:特殊染色,应用:***硬化性疾病的观察,包括:网状纤维染色、弹力纤维染色等。河南单色染色效果
实验室常用天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木(热带豆科植物)干枝中用**浸制出来的一种色素,是**常用的染料之一。苏木精不能直接染色,必须暴露在通气的地方,使他变成氧化苏木精(又叫苏木素)后才能使用,这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长,配置后时间愈久,染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体,易溶于酒精,微溶于水和甘油,是染细胞核的优良材料,他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异,用酸性溶液(如盐酸-酒精)分化后呈红色,水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色,水洗后呈蓝黑色。2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后,磨成粉末,提取出虫红,再用明矾处理,除去其中杂质,就制成洋红。单纯的洋红不能染色,要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸,碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料,染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜,尤其适宜于小型材料的整体染色。 北京双色染色切片美蓝染料***染色时,由于活细胞代谢过程中的脱氢作用,美蓝接受H后就由氧化转变为还原态,故表现出无色。
HE染色原理(1)易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia);而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。
构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为ph6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,ph值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;ph值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的ph值可以影响染色的反应。
脂肪染色剂
苏丹Ⅲ染液
取0.1克苏丹Ⅲ,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%苏丹Ⅲ染液。
这染液能染脂肪,还能染木栓、角质层。
血液染色剂
配方一、瑞氏 (Wright's)染液
取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内,加少量甲醇研磨,使染料溶解,然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存,即可使用。
新鲜配制的染液偏碱性,放置后呈酸性,染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4~6.8。因此,染色时加入缓冲液,可维持一定的酸碱度,使染色效果更好。
这种染液除能染血液,还能染疟原虫。
瑞氏染料可以自制。在100是升05%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝,溶解后放在锅内,蒸上1小时,取出冷却后过滤在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升。随加、随搅拌,使混合液呈紫色。
静置一夜后,用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物,在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后研磨成粉末,即成瑞氏染料。
配方二、甲基紫染液
取甲基紫0.5克,加到100毫升生理盐水中,溶解后加入冰醋酸0.02毫升。 HE染色中文名:苏木精——伊红染色法,外文名:hematoxylin-eosin staining,简称:HE染色法。
实验室常用人工染料(6)亚甲蓝或美蓝:
亚甲蓝或美蓝是碱性染料,呈蓝色粉末状,能溶于水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料,其优点是染色不会过深。
甲基绿:
甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是**有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。
用这些染料配备而成的染液有很多,例如:吕氏(Loeffer)碱性美蓝染液,齐氏(ziehl)石炭酸复红染液等。 阿尔辛蓝(AB)染色法:唾液酸及若硫酸化黏液物资以及一般黏液蓝色,细胞核红色。其他不着色或淡染。湖南阿利新蓝染色方法
地依红染色法:将弹力纤维、结缔组织,细胞核双重染色;弹力纤维呈深棕色,结缔组织浅棕色,细胞核蓝色。河南单色染色效果
HE染色原理(2)脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后,细胞核及钙盐粘液等呈蓝色,可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝,如处理适宜,可使细胞核着清楚的深蓝色,胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆,使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。河南单色染色效果
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