多色染色法示例:Masson三色染色法
1.试剂配制
(1)Masson复合染色液
酸性复红1g,丽春红2g,桔黄G2g,醋酸300ml。
(2)亮绿染色液高绿SF0.1g,醋酸100ml。
2.染色步骤
中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(1)Masson复合染色液5min。
(2)醋酸水溶液稍洗。
(3)5%磷钨酸5-10min。
(4)醋酸水溶液浸洗2次。
(5)亮绿染色液5min,醋酸水洗2次。
(6)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈绿色,肌纤维呈红色,红细胞呈桔红色。
4.注意事项
(1)Masson复合染色液,经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
(2)亮绿染料可用苯胺蓝替换,可用来作为对比观察染色的效果。 硝酸银法是一种金属置换法,将钙盐中的钙用银所置换,银盐在光作用下还原为黑色金属银;将钙盐染为黑色。湖北HE染色切片
网状纤维染色:网状纤维是非常细而短的纤维,大量堆积时则形成致密的网状,故有网状纤维之称。疏松组织中网状纤维比较少,它多分布在结缔组织与其它组织交界处,如在上皮组织与结缔组织交界处的基膜内,***周围以及造血***,内分泌腺的腺细胞团索和外分泌腺的腺末房周围等处均有丰富的网状纤维。
网状纤维的变化,反映了疾病的发生和发展的不同过程,对疾病的诊断有极大意义。网状纤维的多少、粗细紧密、疏松或断裂,都是病理检验的重要指标,尤其是在临床病理诊断中,可根据其存在和分布来鉴别*与肉瘤。所以网状纤维的组织化学染色,在临床病理诊断上占着相当重要的位置。 番红固绿染色上机Lendrum MSB法:将纤维蛋白,细胞核,红细胞多重染色;纤维蛋白红色,陈旧纤维蛋白紫色,细胞核蓝色。
植物细胞壁染色剂:配方一、纤维素细胞壁染液(Ⅰ)取固绿,溶于100毫升95%酒精中,即成。该液能染色纤维素细胞壁,还用于动植物中作浆质染色剂。配方二、纤维素细胞壁染液(Ⅱ)氯化锌20克碘化钾碘先把氯化锌溶于少量蒸馏水中,再加入,即成碘-氯化锌溶液。该染液能把细胞壁染成紫色,胞质染成淡黄色,胞核染成棕色。配方三、纤维素细胞壁染液(Ⅲ)甲液:取1克碘和,溶于100毫升蒸馏水中,即成1%碘液。乙液:取7份硫酸和3份蒸馏水相混,即成665%硫酸溶液。染色时,在材料上滴加甲液,再加一滴乙液,纤维素细胞壁就染成黄色。配方四、木质化细胞壁染液(Ⅰ)硫酸化苯胺(或盐酸化苯胺)1份蒸馏水70份95%酒精30份、硫酸30份将上述各组分相混,将细胞材料放入混合液里染色,可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。配方五、木质化细胞壁染液(Ⅱ)取间**4~5克,溶于100毫升95%酒精中,即成间**-酒**。先在材料.上滴上1滴浓盐酸,然后滴上间**一酒**1滴,木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。配方六、木质化细胞壁染液(Ⅲ)取1克番红,溶于99毫升蒸馏水中,即成1%番红溶液。
四川扬克斯特为您介绍多色染色法示例:
(1)一、Mallory三色染色法(染结缔组织)
1.试剂配制
(1)重铬酸钾液
重铬酸钾2.5g;醋酸5m1,蒸馏水95ml
(2)苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g,桔黄G2g,磷钨酸1g,蒸馏水100m1
(3)酸性复红液酸性复红0.5g,蒸馏水100ml
2.染色步骤
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(2)重铬酸钾液10mino
(3)蒸馏水冲洗2min,蒸馏水2次。
(4)酸性复红液2min,蒸馏稍洗。
(5)苯胺蓝液20min,95%乙醇快速分化。
(6)直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原和网状纤维呈蓝色,软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色:神经胶质纤维、
肌纤维和酸性颗粒呈红色,髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项
(1)酸性复红液易溶解于水,肉眼观察切片上保留一定的红色。
(2)苯胺蓝液染色后,用95%乙醇分化时,须用显微镜观察掌握。
(3)对陈旧的固定标本,其染色效果较差,可增加染色时间。
(4)另张切片,可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。 油红染色法:将脂肪和细胞核双重染色;中性脂肪呈深橙红色,细胞核呈蓝色。
冷冻切片HE染色步骤:(1)冰冻切片固定10~30s
(2)稍水洗1~2s
(3)苏木**染色(60℃)30~60s
(4)流水洗去苏木**5~10s
(5)1%盐酸乙醇1~3s
(6)稍水洗1~2s
(7)促蓝液返蓝5~10s
(8)流水冲洗15~30s
(9)0.5%曙红液染色30~60s
(10)蒸馏水稍洗1~2s
(11)80%乙醇1~2s
(12)95%乙醇1~2s
(13)无水乙醇1~2s
(14)石炭酸二甲苯2~3s
(15)二甲苯(Ⅰ)2~3s
(16)二甲苯(Ⅱ)2~3s
(17)中性树胶封固
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
注意事项:
切片脱水透明,切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。 醛品红法:将HBsAg,弹力纤维及脂褐素双重染色;HBsAg阳性物质紫色,弹力纤维、脂褐素紫色至深紫色。湖北HE染色切片
因脂肪溶于酒精,故在HE染色中则被溶解掉,因此对某些疾病不能判断,所以必须进行脂肪染色。湖北HE染色切片
番红染液的运用特点:
番红通常具有红色成团的化学成像结构(有时被描述为二甲基番红)。同时也有三甲基番红,其在下环的邻位有多加一个甲基。这两个化合物在生物染色应用的表现基本上是相同的,所以大部分番红的制造商并无法区分这两者。商业用番红的配制经常会包含这两种类型的混合。
番红也在分析化学中被用作氧化还原指示剂。
番红是个在一分子中含有两个氮原子的化合物,其为对称的2,8-二甲基-3,7-二氨基吩嗪。可以借由连接一分子氧化的对位-二氨和两分子的一级氨取得。
这是透过对位-氨基偶氮与一级氨的浓缩以及对位-亚硝基二烷基苯胺和二级碱基,例如二苯基间苯二胺,之间的反应。它们为呈现出特有绿色金属光泽的结晶固体;在水中立即被溶解并能染成蓝色或紫色。
同时也是可形成稳定的一元酸盐类的强碱。它们的酒精溶液会显现出红黄色的萤光。酚藏红在自由态时十分不稳定;它的氯化物会形成绿色的板块。其很容易就重氮化,而重氮化的盐类与酒精煮沸后会产生阿朴藏红或引杜林染料,C18H12N3。 湖北HE染色切片
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