植物相关常用染色方法(1):(1)淀粉类:淀粉是植物的主要贮藏物质,它们在各种不同的植物细胞中形成各种形状小同的颗粒。由于碘与淀粉作用可形成碘化淀粉而呈蓝色反应,用碘-碘化钾溶液来测试淀粉粒已成为**常用的方法。
(2)蛋白质类:植物细胞中的蛋白质是构成原生质体的主要成分,也可成为后含物贮存于细胞内,可能是无定形的,也可能成为结晶体或成为糊粉粒。
①较普遍的方法是用碘化钾染色,显微镜下观察可看到被染成黄色的圆球状小颗粒,即为储藏蛋白质的糊粉粒。
②**-溴酚蓝法是检测糊粉粒的**普通方法:在切片上滴加**-溴酚蓝试剂(**10g,溴酚蓝1mg,蒸馏水100ml)1滴,过5分钟后,用0.5%的醋酸冲洗,除去切片上多余的染料,再放在培养皿中水洗5分后用甘油封藏,细胞中如有糊粉粒则被染成鲜蓝色。
③曙红-酒精-苦味酸法也是显示糊粉粒的较好方法:在切片上滴上曙红-酒精-苦味酸试剂(配方曙红1g,溶于苦味酸的95%酒精饱和溶液50ml),镜检,当糊粉粒的基质现出蓝色时,加上数滴纯酒精,此时糊粉粒中球蛋白无色而结晶现出黄绿色,吸去多余酒精,用丁香油透明,加拿大树胶封固,**终蛋白质结晶应为黄色,球蛋白为粉红色,基质为暗红色。 Lendrum MSB法:将纤维蛋白,细胞核,红细胞多重染色;纤维蛋白红色,陈旧纤维蛋白紫色,细胞核蓝色。天津番红固绿染色评价
多色染色法示例:Masson三色染色法
1.试剂配制
(1)Masson复合染色液
酸性复红1g,丽春红2g,桔黄G2g,醋酸300ml。
(2)亮绿染色液高绿SF0.1g,醋酸100ml。
2.染色步骤
中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(1)Masson复合染色液5min。
(2)醋酸水溶液稍洗。
(3)5%磷钨酸5-10min。
(4)醋酸水溶液浸洗2次。
(5)亮绿染色液5min,醋酸水洗2次。
(6)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈绿色,肌纤维呈红色,红细胞呈桔红色。
4.注意事项
(1)Masson复合染色液,经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
(2)亮绿染料可用苯胺蓝替换,可用来作为对比观察染色的效果。 江西荧光染色上机阿尔辛蓝(AB)染色法:唾液酸及若硫酸化黏液物资以及一般黏液蓝色,细胞核红色。其他不着色或淡染。
常规HE染色步骤:
A.二甲苯(Ⅰ)15min
B.二甲苯(Ⅱ)15min
C.二甲苯:无水乙醇=1:12min
D.100%乙醇(Ⅰ)5min
E.100%乙醇(Ⅱ)5min
F.80%乙醇5min
G.蒸馏水5min
H.苏木**染色5min
I.水洗10min或流水冲洗5min
J.1%盐酸乙醇30s
K.水洗30s
L.蒸馏水过洗5s
M.0.5%伊红液染色1-3min
N.蒸馏水稍洗30s
O.80%乙醇稍洗30s
P.95%乙醇(Ⅰ)1min
Q.95%乙醇(Ⅱ)1min
R.无水乙醇(Ⅰ)3min
S.无水乙醇(Ⅱ)3min
T.二甲苯(Ⅰ)3min
U.二甲苯(Ⅱ)3min
V.中性树胶封固
脂肪染色剂
苏丹Ⅲ染液
取0.1克苏丹Ⅲ,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%苏丹Ⅲ染液。
这染液能染脂肪,还能染木栓、角质层。
血液染色剂
配方一、瑞氏 (Wright's)染液
取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内,加少量甲醇研磨,使染料溶解,然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存,即可使用。
新鲜配制的染液偏碱性,放置后呈酸性,染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4~6.8。因此,染色时加入缓冲液,可维持一定的酸碱度,使染色效果更好。
这种染液除能染血液,还能染疟原虫。
瑞氏染料可以自制。在100是升05%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝,溶解后放在锅内,蒸上1小时,取出冷却后过滤在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升。随加、随搅拌,使混合液呈紫色。
静置一夜后,用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物,在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后研磨成粉末,即成瑞氏染料。
配方二、甲基紫染液
取甲基紫0.5克,加到100毫升生理盐水中,溶解后加入冰醋酸0.02毫升。 透明骨骼标本染色剂配方二:茜素红溶液(Ⅱ) 取1克茜素红,溶于100毫升95%酒精,搅拌成深紫色的茜素红染液。
切片的载玻片和盖玻片有什么区别?
载玻片是用来放被测标本的,而盖玻片是盖在被测标本之上的。
1.载玻片在下边,是你要观察版的物质的盛放载体权,就是你要把东西放你它上面。
2.盖玻片比载玻片要小,载玻片主要用来盛放观察物,盖玻片是盖在载玻片上的,用做固定用的。
3.载玻片是转片中的比较厚的一块玻璃片,是用来承载实物的;盖玻片是那个小的圆的或者方/薄 的。
4.装片是一套东西的总称,包括载玻片、盖玻片和装载的实物。
5.盖玻片正方形,载玻片长方形,且宽度都较盖玻片的边长大。
载玻片和盖玻片如何清洗?
载玻片是一直泡75%酒精,用的时候才拿出来晾干或者烧干酒精就用,不会有什么灰尘;盖玻片是一次性的,用完就扔了。
因脂肪溶于酒精,故在HE染色中则被溶解掉,因此对某些疾病不能判断,所以必须进行脂肪染色。广东油红染色原理
维多利亚蓝法:将HBsAg阳性,细胞核双重染色;HBsAg阳性呈蓝绿色,细胞核红色。天津番红固绿染色评价
实验室常用人工染料:(1)人工染料:即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广。它们的缺点是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射,也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红是酸性染料,呈红色粉末状,能容于水,略溶于酒精(0.3%)。 他是良好的细胞制染色剂,在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染,能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。
2、刚果红
刚果红是酸性染料,呈枣红色粉末状,能溶于水喝酒精,遇酸呈蓝色。他能作染料,也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色,也可用作类淀粉染色,由于他能溶于水和酒精,所以洗涤和脱水处理要迅速。 天津番红固绿染色评价
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