贵州番红固绿染色方法

网状纤维染色：网状纤维是非常细而短的纤维，大量堆积时则形成致密的网状，故有网状纤维之称。疏松组织中网状纤维比较少，它多分布在结缔组织与其它组织交界处，如在上皮组织与结缔组织交界处的基膜内，***周围以及造血***，内分泌腺的腺细胞团索和外分泌腺的腺末房周围等处均有丰富的网状纤维。

网状纤维的变化，反映了疾病的发生和发展的不同过程，对疾病的诊断有极大意义。网状纤维的多少、粗细紧密、疏松或断裂，都是病理检验的重要指标，尤其是在临床病理诊断中，可根据其存在和分布来鉴别*与肉瘤。所以网状纤维的组织化学染色，在临床病理诊断上占着相当重要的位置。 普鲁士蓝法 反应显示三价铁染色结果：含铁血黄素蓝色，其他浅红色。贵州番红固绿染色方法

（1）*与肉瘤的鉴别：在网状纤维染色下可清楚显示出肉瘤每一个细胞周围有网状纤维围绕，或似为团状或巢状的瘤组织，但团巢内仍有破碎的网状纤维，*显示为明显巢或索状，巢内无网状纤维。

（2）骨基质与浓缩的分泌物、血浆或水肿液的鉴别：骨基质内有网状纤维，而后者无。

（3）炎症细胞与*细胞的鉴别：在支气管活检中有时挤压较重，一些深染的细胞挤压成团，难以判断是受挤压的炎症细胞。这种病例染网状纤维有利于鉴别，炎症细胞不成巢，小细胞*可有巢状或索状结构。 北京多色染色评价苯酚碱性品红法：使抗酸杆菌的糖脂蜡质与碱性品红结合形成复合物，从而使抗酸杆菌呈红色。

弹力纤维染色应用：

（1）动静脉的辨认：在血管病变时是动脉还是静脉以及是否为血管壁难辨认时，弹力纤维染色有助于辨认。有弹力板者为动脉，有弹力纤维构成血管轮廓者为血管。弹力纤维抗损伤能力较强，故弹力性纤维构成血管轮廓不易损坏。

（2）弹力纤维瘤的诊断：弹力纤维染色可见瘤样病变内有大量弹力纤维增生，非真性**。

（3）心血管先天性弹力组织增生，这组疾病有先天性内膜炎及冠状动脉的弹力纤维组织增生。弹力纤维染色有助于诊断。

（4）弹力纤维损伤性疾病：这组疾病有肺气肿、***、大动脉中层炎症等，弹力纤维染色有助于这些疾病的观察诊断。

（5）一些与弹力纤维变化有关的皮肤疾病的诊断与鉴别诊断：这组疾病有皮肤松弛症，萎缩性硬化性苔藓等，其诊断与鉴别诊断常依赖于弹力纤维染色，以观察弹力纤维变化。

    甲基绿派洛宁法：1、试剂配制：（1）2%甲基绿水溶液：甲基绿（methylgreen）1g蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提，方法详后。（2）5%派洛宁水溶液：派洛宁G（pyronineG）1g蒸馏水加至20ml（3）醋酸盐缓冲液（pH）醋酸液41ml醋酸钠液59ml（4）甲基绿派洛宁染液：2%甲基绿水溶液（经抽提）5ml5%派洛宁水溶液1ml蒸馏水12ml醋酸盐缓冲液（pH）18ml2、操作步骤：（1）新鲜组织固定于Carnoy氏液（4℃）3~6小时，经95%酒精和无水酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。（2）切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。（3）置入甲基绿派洛宁染液于室温染30~60分钟。（4）取出切片，不经水洗，用滤纸吸干多余染液。（5）用**迅速分化。（6）转入**二甲苯（1:1）稍洗。（7）二甲苯透明2~3次。（8）中性树胶封固。结果：存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色，胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。3、对照方法：（1）取另一连续切片用核糖核酸酶1mg/1ml于37℃温箱内消化3小时，蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。（2）切片在10%高氯酸于4℃处理12~18小时，水洗后用1%碳酸钠液中和2分钟，流水冲洗5分钟，再用蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。经上述方法之一处理后的切片就为阴性。 镀银染色：把固定后的组织或切片浸于银溶液中，再用还原剂处理，使之呈现深棕色或黑色。

植物相关常用染色方法（1）：(1)淀粉类：淀粉是植物的主要贮藏物质，它们在各种不同的植物细胞中形成各种形状小同的颗粒。由于碘与淀粉作用可形成碘化淀粉而呈蓝色反应，用碘－碘化钾溶液来测试淀粉粒已成为**常用的方法。

(2)蛋白质类：植物细胞中的蛋白质是构成原生质体的主要成分，也可成为后含物贮存于细胞内，可能是无定形的，也可能成为结晶体或成为糊粉粒。

①较普遍的方法是用碘化钾染色，显微镜下观察可看到被染成黄色的圆球状小颗粒，即为储藏蛋白质的糊粉粒。

②**－溴酚蓝法是检测糊粉粒的**普通方法：在切片上滴加**－溴酚蓝试剂（**10g,溴酚蓝1mg,蒸馏水100ml)1滴，过5分钟后，用0.5%的醋酸冲洗，除去切片上多余的染料，再放在培养皿中水洗5分后用甘油封藏，细胞中如有糊粉粒则被染成鲜蓝色。

③曙红－酒精－苦味酸法也是显示糊粉粒的较好方法：在切片上滴上曙红－酒精－苦味酸试剂（配方曙红1g,溶于苦味酸的95%酒精饱和溶液50ml),镜检，当糊粉粒的基质现出蓝色时，加上数滴纯酒精，此时糊粉粒中球蛋白无色而结晶现出黄绿色，吸去多余酒精，用丁香油透明，加拿大树胶封固，**终蛋白质结晶应为黄色，球蛋白为粉红色，基质为暗红色。 醛品红法：将HBsAg，弹力纤维及脂褐素双重染色；HBsAg阳性物质紫色，弹力纤维、脂褐素紫色至深紫色。贵阳番红固绿染色切片

缓冲亚甲蓝法：将尼氏体及核仁和背景双重染色；尼氏体及核仁蓝色，背景红色或粉红色。贵州番红固绿染色方法

番红染液的运用特点：

番红通常具有红色成团的化学成像结构(有时被描述为二甲基番红)。同时也有三甲基番红，其在下环的邻位有多加一个甲基。这两个化合物在生物染色应用的表现基本上是相同的，所以大部分番红的制造商并无法区分这两者。商业用番红的配制经常会包含这两种类型的混合。

番红也在分析化学中被用作氧化还原指示剂。

番红是个在一分子中含有两个氮原子的化合物，其为对称的2,8-二甲基-3,7-二氨基吩嗪。可以借由连接一分子氧化的对位-二氨和两分子的一级氨取得。

这是透过对位-氨基偶氮与一级氨的浓缩以及对位-亚硝基二烷基苯胺和二级碱基，例如二苯基间苯二胺，之间的反应。它们为呈现出特有绿色金属光泽的结晶固体；在水中立即被溶解并能染成蓝色或紫色。

同时也是可形成稳定的一元酸盐类的强碱。它们的酒精溶液会显现出红黄色的萤光。酚藏红在自由态时十分不稳定；它的氯化物会形成绿色的板块。其很容易就重氮化，而重氮化的盐类与酒精煮沸后会产生阿朴藏红或引杜林染料，C18H12N3。 贵州番红固绿染色方法

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