冷冻切片HE染色步骤:（1）冰冻切片固定10～30s
（2）稍水洗1～2s
（3）苏木**染色（60℃）30～60s
（4）流水洗去苏木**5～10s
（5）1%盐酸乙醇1～3s
（6）稍水洗1～2s
（7）促蓝液返蓝5～10s
（8）流水冲洗15～30s
（9）0.5%曙红液染色30～60s
（10）蒸馏水稍洗1～2s
（11）80%乙醇1～2s
（12）95%乙醇1～2s
（13）无水乙醇1～2s
（14）石炭酸二甲苯2～3s
（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s
（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s
（17）中性树胶封固
注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
注意事项：
切片脱水透明，切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。 HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中**基本、使用*****的技术方法。江西荧光染色切片
细菌特殊染色剂配方一、芽孢染液用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。
甲液：取5克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成孔雀绿染液。
乙液：取番红花红0.5克,加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，集成番红花红复染液。
配方二、荚膜染液此配方先用甲液染色，后用乙液复染。
甲液：取结晶紫0.1克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。
乙液：取硫酸铜(31.3克)，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，即成20%硫酸铜脱色剂。
配方三、鞭毛染液
甲液
饱和明矾溶液2毫升5%石炭酸溶液5毫升
20%丹宁酸溶液2毫升
乙液
碱性品红11克95%酒精100毫升
使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混，过滤即可。 云南阿利新蓝染色评价masson染色用来显示组织中纤维以及炎性因子的染色方法之一。
植物相关常用染色方法（2）：油脂：在植物解剖学研究中，常用苏丹Ⅲ（或苏丹 IV) 溶液对脂肪性物质进行染色切片浸入上述溶液中 24h, 然后用 50% 的酒精洗涤，加上甘油后观察，油脂可被染成淡黄至红色，栓质和角质也同样被染色。如果细胞中存在硬脂或脂肪酸结晶时，染色十分缓慢，可稍加热。
单宁：单宁的化学结构比较复杂，它是一种多元酚的衍生物，大多呈胶体状态，存在于植物细胞的液泡中，或形成单独的液泡。将切片浸人 10% 的氯化铁水溶液中（或加－些碳酸钠），单宁物质则被染成蓝绿色。
橡胶：天然橡胶是异戊二烯的聚合物，植物组织中所含橡胶物质大多存在千乳汁管中，也有的存在于液泡中。对存在于乳汁管中的橡胶成分，可以用苏丹Ⅲ溶液染色材料应先用 10%铬酸 +70%酒精（使用前配制）固定 24h, 以使橡胶凝固，用刀片切去1-2mm, 而后徒手切片，于载玻片上加上苏丹Ⅲ或苏丹 Ⅳ溶液染色，乳汁管中的橡胶类物质被染成红色。
胶原纤维染色：凡是间叶组织细胞都可产生网织纤维，也可产生胶原纤维，纤维母细胞是产生胶原纤维的主要细胞。胶原纤维是结缔组织中的主要纤维，是结缔组织中起支持作用的重要部分，具有一定的韧性和坚固性，能抵抗一定的牵引力而不致撕裂。胶原纤维是原胶原互相错开1/4平行排列交联成胶原原纤维，胶原原纤维再聚合成较宽的结构。按胶原的化学成分可分为15种，间质中的胶原纤维主要由I、Ⅱ、Ⅲ型胶原组成，新鲜时呈白色，故又称为白纤维。在HE染色中呈均一的粉红色，与周围间质区分不是很清楚。染色后，便可明显区别开来，易于观察病变时胶原纤维的变化。
应用：
（1）***硬化性疾病的观察：如肝硬变、心肌瘢痕的观察，胶原染色更易于观察诊断。
（2）瘢痕与淀粉样物质鉴别：前者胶原纤维染色为阳性，后者为阴性。
（3）骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别：利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱，纵横交错，后者较规则。 苯酚碱性品红法：使抗酸杆菌的糖脂蜡质与碱性品红结合形成复合物，从而使抗酸杆菌呈红色。
实验室常用人工染料：（1）人工染料：即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它们的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精(0.3%)。 他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
2、刚果红
刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。 银氨染色法：将网状纤维，胶原纤维双重染色；网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈黄色。多色染色质量
醛品红法：将HBsAg，弹力纤维及脂褐素双重染色；HBsAg阳性物质紫色，弹力纤维、脂褐素紫色至深紫色。江西荧光染色切片
实验室常用人工染料（5）中性红：
中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无毒，常做***染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。
番红：
番红是碱性染料，能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。 江西荧光染色切片
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