脂肪染色剂
苏丹Ⅲ染液
取0.1克苏丹Ⅲ,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%苏丹Ⅲ染液。
这染液能染脂肪,还能染木栓、角质层。
血液染色剂
配方一、瑞氏 (Wright's)染液
取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内,加少量甲醇研磨,使染料溶解,然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存,即可使用。
新鲜配制的染液偏碱性,放置后呈酸性,染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4~6.8。因此,染色时加入缓冲液,可维持一定的酸碱度,使染色效果更好。
这种染液除能染血液,还能染疟原虫。
瑞氏染料可以自制。在100是升05%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝,溶解后放在锅内,蒸上1小时,取出冷却后过滤在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升。随加、随搅拌,使混合液呈紫色。
静置一夜后,用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物,在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后研磨成粉末,即成瑞氏染料。
配方二、甲基紫染液
取甲基紫0.5克,加到100毫升生理盐水中,溶解后加入冰醋酸0.02毫升。 油红O脂肪法是显示组织内脂肪的染色方法,染料在脂肪内能高度溶解,可特异性的使组织内的中性脂肪着色。江西masson染色步骤
四川扬克斯特为您介绍多色染色法示例:
(1)一、Mallory三色染色法(染结缔组织)
1.试剂配制
(1)重铬酸钾液
重铬酸钾2.5g;醋酸5m1,蒸馏水95ml
(2)苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g,桔黄G2g,磷钨酸1g,蒸馏水100m1
(3)酸性复红液酸性复红0.5g,蒸馏水100ml
2.染色步骤
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(2)重铬酸钾液10mino
(3)蒸馏水冲洗2min,蒸馏水2次。
(4)酸性复红液2min,蒸馏稍洗。
(5)苯胺蓝液20min,95%乙醇快速分化。
(6)直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原和网状纤维呈蓝色,软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色:神经胶质纤维、
肌纤维和酸性颗粒呈红色,髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项
(1)酸性复红液易溶解于水,肉眼观察切片上保留一定的红色。
(2)苯胺蓝液染色后,用95%乙醇分化时,须用显微镜观察掌握。
(3)对陈旧的固定标本,其染色效果较差,可增加染色时间。
(4)另张切片,可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。 福建荧光染色切片苦味酸-酸性品红法 胶原纤维,肌纤维、细胞质双重染色;胶原纤维红色,肌纤维和红细胞黄色,细胞核蓝褐色。
实验室常用人工染料:(1)人工染料:即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广。它们的缺点是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射,也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红是酸性染料,呈红色粉末状,能容于水,略溶于酒精(0.3%)。 他是良好的细胞制染色剂,在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染,能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。
2、刚果红
刚果红是酸性染料,呈枣红色粉末状,能溶于水喝酒精,遇酸呈蓝色。他能作染料,也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色,也可用作类淀粉染色,由于他能溶于水和酒精,所以洗涤和脱水处理要迅速。
线粒体染色剂:
配方一、詹钠斯绿B(Janu’s green酒精饱和溶液)
取125毫升詹钠斯绿B,加入到625毫升无水酒精中,搅拌,即成烟鲁绿B酒精饱和染液。
(1)取詹钠斯绿酒精饱和染液按1: 30000比例加蒸馏水稀释,用来染原生动物线粒体。
(2)取詹钠斯绿酒精饱和液,按1: 1000比例加蒸馏水稀释,用来染新鲜蛙血线粒体。
配方二、詹钠斯绿B中性红染液
先配制詹钠斯绿B和中性红酒精包和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法:
取125毫升中性红,加入到50毫升无水酒精中,搅拌。
在10毫升生理盐水(两栖类生理盐水浓度为0.65%;哺乳类生理盐水浓度为0.9%)中,加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7~1毫升,中性红酒精饱和液2毫升,混合。詹钠斯绿B稀释液是***染液。 地衣红法:将HBsAg染色;HBsAg阳性呈棕色。
番红染液的运用特点:
番红通常具有红色成团的化学成像结构(有时被描述为二甲基番红)。同时也有三甲基番红,其在下环的邻位有多加一个甲基。这两个化合物在生物染色应用的表现基本上是相同的,所以大部分番红的制造商并无法区分这两者。商业用番红的配制经常会包含这两种类型的混合。
番红也在分析化学中被用作氧化还原指示剂。
番红是个在一分子中含有两个氮原子的化合物,其为对称的2,8-二甲基-3,7-二氨基吩嗪。可以借由连接一分子氧化的对位-二氨和两分子的一级氨取得。
这是透过对位-氨基偶氮与一级氨的浓缩以及对位-亚硝基二烷基苯胺和二级碱基,例如二苯基间苯二胺,之间的反应。它们为呈现出特有绿色金属光泽的结晶固体;在水中立即被溶解并能染成蓝色或紫色。
同时也是可形成稳定的一元酸盐类的强碱。它们的酒精溶液会显现出红黄色的萤光。酚藏红在自由态时十分不稳定;它的氯化物会形成绿色的板块。其很容易就重氮化,而重氮化的盐类与酒精煮沸后会产生阿朴藏红或引杜林染料,C18H12N3。 美蓝染料***染色时,由于活细胞代谢过程中的脱氢作用,美蓝接受H后就由氧化转变为还原态,故表现出无色。北京荧光染色方法
甲苯胺蓝法:将肥大细胞染色;肥大细胞紫红色,背景呈蓝色。江西masson染色步骤
实验室常用人工染料(5)中性红:
中性红是弱碱性染料,呈红色粉末状,能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。它的碱性溶液中呈现黄色,在强碱性溶液中呈蓝色,而在弱酸性溶液中呈红色,所以能用作指示剂。中性红无毒,常做***染色的染料,用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液,用作显示尼尔体的常用染料。
番红:
番红是碱性染料,能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料,能染细胞核、染色体和植物蛋白质,示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织,还能染孢子囊。 江西masson染色步骤
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