糖类染色:
糖类从组织化学技术角度来分,可分为多糖、中性粘液物质、酸性粘液物质、粘蛋白及粘脂质。多糖主要指糖原,它是一种胶样液态存在于肝细胞、骨骼肌、心肌等处。因糖原在肝脏及心肌疾患及某些**的病变中分布和量都有一定改变,故糖原的染色在临床病理诊断上具有重要意义。
(1)肝及心肌糖原沉着症的诊断:糖原染色显示在肝或心肌细胞内有大量糖原存在即可确诊。
(2)糖尿病性肾小球硬化症或血管病的诊断。
(3)高雪氏病与尼曼——匹克氏病的鉴别:前者为阳性、后者为阴性,做此染色较易鉴别。
(4)骨内骨外尤文氏肉瘤的诊断:此瘤80%细胞内有较多糖原,糖原染色为阳性,所以糖原染色为阳性(大多数细胞)可以协助诊断。
(5)腺泡状软组织肉瘤与化感瘤:前者棒状小体糖原染色为阳性。
(6)间皮瘤或滑膜肉瘤与其它*的鉴别:前者分泌含透明质酸的粘液,糖原染色为阳性,但透明质酸酶消化后即呈阴性反应,如有此染色特点,即可有助于诊断滑膜肉瘤或间皮瘤而不是*。 甲醇刚果红法:将淀粉样物,细胞核双重染色;淀粉样物紫红色,细胞核蓝色。陕西多色染色切片
四川扬克斯特为您介绍多色染色法示例:
(1)一、Mallory三色染色法(染结缔组织)
1.试剂配制
(1)重铬酸钾液
重铬酸钾2.5g;醋酸5m1,蒸馏水95ml
(2)苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g,桔黄G2g,磷钨酸1g,蒸馏水100m1
(3)酸性复红液酸性复红0.5g,蒸馏水100ml
2.染色步骤
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(2)重铬酸钾液10mino
(3)蒸馏水冲洗2min,蒸馏水2次。
(4)酸性复红液2min,蒸馏稍洗。
(5)苯胺蓝液20min,95%乙醇快速分化。
(6)直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原和网状纤维呈蓝色,软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色:神经胶质纤维、
肌纤维和酸性颗粒呈红色,髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项
(1)酸性复红液易溶解于水,肉眼观察切片上保留一定的红色。
(2)苯胺蓝液染色后,用95%乙醇分化时,须用显微镜观察掌握。
(3)对陈旧的固定标本,其染色效果较差,可增加染色时间。
(4)另张切片,可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。 重庆甲苯胺蓝染色试剂缓冲亚甲蓝法:将尼氏体及核仁和背景双重染色;尼氏体及核仁蓝色,背景红色或粉红色。
多色染色法示例:Masson三色染色法
1.试剂配制
(1)Masson复合染色液
酸性复红1g,丽春红2g,桔黄G2g,醋酸300ml。
(2)亮绿染色液高绿SF0.1g,醋酸100ml。
2.染色步骤
中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(1)Masson复合染色液5min。
(2)醋酸水溶液稍洗。
(3)5%磷钨酸5-10min。
(4)醋酸水溶液浸洗2次。
(5)亮绿染色液5min,醋酸水洗2次。
(6)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈绿色,肌纤维呈红色,红细胞呈桔红色。
4.注意事项
(1)Masson复合染色液,经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
(2)亮绿染料可用苯胺蓝替换,可用来作为对比观察染色的效果。
Masson染色法试剂:Regaud氏苏木精:苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用Masson丽春红酸性复红液:丽春红,酸性复红,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml:冰醋酸ml,蒸馏水100ml1%磷钼酸水溶液:磷钼酸1g,蒸馏水100ml苯胺蓝水溶液:苯胺蓝2g,蒸馏水98ml,冰醋酸2ml1%光绿水溶液:光绿1g,蒸馏水100ml步骤:1.石蜡切片脱蜡至水2.铬化处理或去汞盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)3.依次自来水和蒸馏水洗4.用Regaud苏木精染液或Weigert苏木**染核5-10min5.充分水洗,如过染可盐酸酒精分化6.蒸馏水洗7.用Masson丽春红酸性复红液5-10min8.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻9.1%磷钼酸水溶液分化3-5min10.不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min11.以12.95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色。注意事项:1.组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间2.磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制,肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可。 银氨染色法:将网状纤维,胶原纤维双重染色;网状纤维呈黑色,胶原纤维呈红色,背景呈黄色。
HE染色原理(2)脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后,细胞核及钙盐粘液等呈蓝色,可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝,如处理适宜,可使细胞核着清楚的深蓝色,胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆,使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。透明骨骼标本染色剂配方二:茜素红溶液(Ⅱ) 取1克茜素红,溶于100毫升95%酒精,搅拌成深紫色的茜素红染液。云南天狼星红染色原理
苦味酸-酸性品红法 胶原纤维,肌纤维、细胞质双重染色;胶原纤维红色,肌纤维和红细胞黄色,细胞核蓝褐色。陕西多色染色切片
甲基绿派洛宁法:1、试剂配制:(1)2%甲基绿水溶液:甲基绿(methylgreen)1g蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提,方法详后。(2)5%派洛宁水溶液:派洛宁G(pyronineG)1g蒸馏水加至20ml(3)醋酸盐缓冲液(pH)醋酸液41ml醋酸钠液59ml(4)甲基绿派洛宁染液:2%甲基绿水溶液(经抽提)5ml5%派洛宁水溶液1ml蒸馏水12ml醋酸盐缓冲液(pH)18ml2、操作步骤:(1)新鲜组织固定于Carnoy氏液(4℃)3~6小时,经95%酒精和无水酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。(2)切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。(3)置入甲基绿派洛宁染液于室温染30~60分钟。(4)取出切片,不经水洗,用滤纸吸干多余染液。(5)用**迅速分化。(6)转入**二甲苯(1:1)稍洗。(7)二甲苯透明2~3次。(8)中性树胶封固。结果:存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色,胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。3、对照方法:(1)取另一连续切片用核糖核酸酶1mg/1ml于37℃温箱内消化3小时,蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。(2)切片在10%高氯酸于4℃处理12~18小时,水洗后用1%碳酸钠液中和2分钟,流水冲洗5分钟,再用蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。经上述方法之一处理后的切片就为阴性。 陕西多色染色切片
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