实验室常用人工染料(3)苏丹II:
苏丹II是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。 苏丹I是脂肪染色剂。
伊红:
这类染料种类很多。常用的伊红Y,是酸性染料,呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状,溶于水(15摄氏度是溶解度达44%)和酒精(溶于无水酒精的溶解度为2%)。伊红在动物制片中广泛应用,是很好的细胞质染料,常用作苏木精的衬染剂。
碱性品(复)红:
碱性品红是碱性染料,呈暗红色粉末或结晶状,能溶于水(溶解度1%)和酒精(溶解度8%)。碱性品红在生物学制片中用途很广,可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和***组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁,又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中,长用来鉴别结核杆菌。在尔根氏反应中用作组织化学试剂,已核查脱氧核糖核酸。 普鲁士蓝法 反应显示三价铁染色结果:含铁血黄素蓝色,其他浅红色。昆明流式染色质量
细菌特殊染色剂配方一、芽孢染液用此配方染色是用甲液染色后,用乙液复染。
甲液:取5克孔雀绿,加入少量蒸馏水,使它溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,即成孔雀绿染液。
乙液:取番红花红0.5克,加入少量蒸馏水,使它溶解后,用蒸馏水稀释到100毫升,集成番红花红复染液。
配方二、荚膜染液此配方先用甲液染色,后用乙液复染。
甲液:取结晶紫0.1克,溶于少量蒸馏水后,加水稀释到100毫升,再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。
乙液:取硫酸铜(31.3克),溶于少量蒸馏水后,加水稀释到100毫升,即成20%硫酸铜脱色剂。
配方三、鞭毛染液
甲液
饱和明矾溶液2毫升5%石炭酸溶液5毫升
20%丹宁酸溶液2毫升
乙液
碱性品红11克95%酒精100毫升
使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混,过滤即可。 昆明流式染色质量中文名:masson染色,释义:用两种或三种阴离子染料混合,作用:显示组织中纤维的染色方法。
显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的染色步骤:
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(2)高锰酸钾硫酸液氧化3min后,自来水浸洗后,用2%草酸漂白2min.
(3)5%硫酸铁铵1min.
(4)Gomori氨性银改良液染1min.
(5)蒸馏水洗2次,用15%甲醛液还原1min.
(6)蒸馏水洗2次,氯化金30s,蒸馏水洗1次。
(7)70%乙醇浸一次,再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h.
(8)95%乙醇分化1min左右。
(9)浸入蒸馏水中1min后,用丽春红S染色液染色2min.
(10)直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈红色,网状纤维呈黑色,弹力纤维呈绿色,肌肉和红细胞呈淡黄色。
4.注意事项
氨性银液滴染时,要用干净吸管,防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒,应将蒸馏水冲洗切片上的银液,这样就不会使银液表面的银挥发.
颗粒而沉积在组织上。
线粒体染色剂:
配方一、詹钠斯绿B(Janu’s green酒精饱和溶液)
取125毫升詹钠斯绿B,加入到625毫升无水酒精中,搅拌,即成烟鲁绿B酒精饱和染液。
(1)取詹钠斯绿酒精饱和染液按1: 30000比例加蒸馏水稀释,用来染原生动物线粒体。
(2)取詹钠斯绿酒精饱和液,按1: 1000比例加蒸馏水稀释,用来染新鲜蛙血线粒体。
配方二、詹钠斯绿B中性红染液
先配制詹钠斯绿B和中性红酒精包和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法:
取125毫升中性红,加入到50毫升无水酒精中,搅拌。
在10毫升生理盐水(两栖类生理盐水浓度为0.65%;哺乳类生理盐水浓度为0.9%)中,加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7~1毫升,中性红酒精饱和液2毫升,混合。詹钠斯绿B稀释液是***染液。 甲苯胺蓝法:将嗜铬细胞细胞质和细胞核染色;染色结果嗜铬细胞细胞质呈绿黄色,细胞核呈蓝色。
冷冻切片HE染色步骤:(1)冰冻切片固定10~30s
(2)稍水洗1~2s
(3)苏木**染色(60℃)30~60s
(4)流水洗去苏木**5~10s
(5)1%盐酸乙醇1~3s
(6)稍水洗1~2s
(7)促蓝液返蓝5~10s
(8)流水冲洗15~30s
(9)0.5%曙红液染色30~60s
(10)蒸馏水稍洗1~2s
(11)80%乙醇1~2s
(12)95%乙醇1~2s
(13)无水乙醇1~2s
(14)石炭酸二甲苯2~3s
(15)二甲苯(Ⅰ)2~3s
(16)二甲苯(Ⅱ)2~3s
(17)中性树胶封固
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
注意事项:
切片脱水透明,切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。 甲苯胺蓝法:将肥大细胞染色;肥大细胞紫红色,背景呈蓝色。山东单色染色切片
银氨染色法:将网状纤维,胶原纤维双重染色;网状纤维呈黑色,胶原纤维呈红色,背景呈黄色。昆明流式染色质量
实验室常用人工染料(2)甲基蓝:
甲基蓝是弱酸性染料,能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞,也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的***染色剂。甲基蓝极易氧化,因此用他染色后不能长久保存。
固绿:
固绿是酸性染料,能溶于水(溶解度为4%)和酒精(海解度为90)0图绿是“种染合有势质的纤维素细胞组织的染色剂,四轻奥物租和植租物组织应用极广。他和苏木精、看红并列为植物组织学上三中**常用的染料。 昆明流式染色质量
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