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染色基本参数
  • 品牌
  • 扬克斯
  • 型号
  • 适宜人群
  • 动物
  • 不适宜人群
  • 动物
  • 保质期
  • 3个月
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甲苯胺蓝染色法 :1. 甲苯胺蓝液

甲苯胺蓝0.5g蒸馏水定容至100ml

2. 冰醋酸液

冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml

染色步骤:

1.组织切片常规脱蜡至水

2.入甲苯胺蓝液30min

3.稍水洗

4.入冰醋酸液分化,直到胞核和颗粒清晰。

5.稍水洗,用冷风吹干

6.二甲苯透明,中性树胶封固

(二)

①切片脱腊至水。

②蒸馏水浸洗3次。

⑤0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。

④水洗,洗去多余染液。

⑤各级酒精脱水。

⑥二甲苯透明,中性树胶封固。

试剂的配制

称取0.1g甲苯胺蓝,溶于100ml 0.1M 醋酸盐缓冲液中,置室温5天后,即可使用染液于室温下可保存3个月,若放于4℃水箱则可保存半年左右,但该液的染色效果在早期为比较好,若染液存放时间较长,则染色偏淡,应适应延长染色时间。 HE染色中文名:苏木精——伊红染色法,外文名:hematoxylin-eosin staining,简称:HE染色法。河北荧光染色结果

HE染色的试剂与仪器A:0.5~1%的伊红酒精溶液:

称取伊红Y0.5~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可)100毫升溶解。

B:苏木素染液配方:(配制3000ml,可按比列减少)

苏木精6g

无水乙醇100ml

硫酸铝钾150g

蒸馏水2000ml

碘酸钠1.2g

冰醋酸120ml

甘油900ml

配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,***加入冰醋酸和碘酸钠。

C:1%盐酸酒精分化液:将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。 阿利新蓝染色步骤高碘酸复红法:将***和红细胞双重染色;***紫红色,红细胞浅黄色。

植物相关常用染色方法(1):(1)淀粉类:淀粉是植物的主要贮藏物质,它们在各种不同的植物细胞中形成各种形状小同的颗粒。由于碘与淀粉作用可形成碘化淀粉而呈蓝色反应,用碘-碘化钾溶液来测试淀粉粒已成为**常用的方法。

(2)蛋白质类:植物细胞中的蛋白质是构成原生质体的主要成分,也可成为后含物贮存于细胞内,可能是无定形的,也可能成为结晶体或成为糊粉粒。

①较普遍的方法是用碘化钾染色,显微镜下观察可看到被染成黄色的圆球状小颗粒,即为储藏蛋白质的糊粉粒。

②**-溴酚蓝法是检测糊粉粒的**普通方法:在切片上滴加**-溴酚蓝试剂(**10g,溴酚蓝1mg,蒸馏水100ml)1滴,过5分钟后,用0.5%的醋酸冲洗,除去切片上多余的染料,再放在培养皿中水洗5分后用甘油封藏,细胞中如有糊粉粒则被染成鲜蓝色。

③曙红-酒精-苦味酸法也是显示糊粉粒的较好方法:在切片上滴上曙红-酒精-苦味酸试剂(配方曙红1g,溶于苦味酸的95%酒精饱和溶液50ml),镜检,当糊粉粒的基质现出蓝色时,加上数滴纯酒精,此时糊粉粒中球蛋白无色而结晶现出黄绿色,吸去多余酒精,用丁香油透明,加拿大树胶封固,**终蛋白质结晶应为黄色,球蛋白为粉红色,基质为暗红色。

HE染色原理(1)易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia);而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。

构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为ph6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,ph值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;ph值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的ph值可以影响染色的反应。漂白法:将黑色素及嗜银细胞,胶原纤维双重染色;黑色素及嗜银细胞颗粒黑色,胶原纤维红色,背景淡黄。

常规HE染色步骤:

A.二甲苯(Ⅰ)15min

B.二甲苯(Ⅱ)15min

C.二甲苯:无水乙醇=1:12min

D.100%乙醇(Ⅰ)5min

E.100%乙醇(Ⅱ)5min

F.80%乙醇5min

G.蒸馏水5min

H.苏木**染色5min

I.水洗10min或流水冲洗5min

J.1%盐酸乙醇30s

K.水洗30s

L.蒸馏水过洗5s

M.0.5%伊红液染色1-3min

N.蒸馏水稍洗30s

O.80%乙醇稍洗30s

P.95%乙醇(Ⅰ)1min

Q.95%乙醇(Ⅱ)1min

R.无水乙醇(Ⅰ)3min

S.无水乙醇(Ⅱ)3min

T.二甲苯(Ⅰ)3min

U.二甲苯(Ⅱ)3min

V.中性树胶封固 透明骨骼标本染色剂配方一:茜素红染液(Ⅰ) 取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。广东双色染色切片

苏丹Ⅲ染色法:将脂肪和细胞核染色,遇脂肪变橘黄色,细胞核呈蓝色。河北荧光染色结果

实验室常用人工染料:(1)人工染料:即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广。它们的缺点是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射,也能经几年不褪色。

1、酸性品红

酸性品红是酸性染料,呈红色粉末状,能容于水,略溶于酒精(0.3%)。 他是良好的细胞制染色剂,在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染,能显示线粒体。

组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。

2、刚果红

刚果红是酸性染料,呈枣红色粉末状,能溶于水喝酒精,遇酸呈蓝色。他能作染料,也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色,也可用作类淀粉染色,由于他能溶于水和酒精,所以洗涤和脱水处理要迅速。 河北荧光染色结果

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