黑龙江PAS染色方法

    甲基绿派洛宁法：1、试剂配制：（1）2%甲基绿水溶液：甲基绿（methylgreen）1g蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提，方法详后。（2）5%派洛宁水溶液：派洛宁G（pyronineG）1g蒸馏水加至20ml（3）醋酸盐缓冲液（pH）醋酸液41ml醋酸钠液59ml（4）甲基绿派洛宁染液：2%甲基绿水溶液（经抽提）5ml5%派洛宁水溶液1ml蒸馏水12ml醋酸盐缓冲液（pH）18ml2、操作步骤：（1）新鲜组织固定于Carnoy氏液（4℃）3~6小时，经95%酒精和无水酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。（2）切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。（3）置入甲基绿派洛宁染液于室温染30~60分钟。（4）取出切片，不经水洗，用滤纸吸干多余染液。（5）用**迅速分化。（6）转入**二甲苯（1:1）稍洗。（7）二甲苯透明2~3次。（8）中性树胶封固。结果：存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色，胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。3、对照方法：（1）取另一连续切片用核糖核酸酶1mg/1ml于37℃温箱内消化3小时，蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。（2）切片在10%高氯酸于4℃处理12~18小时，水洗后用1%碳酸钠液中和2分钟，流水冲洗5分钟，再用蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。经上述方法之一处理后的切片就为阴性。 切片中，载玻片是用来放被测标本的，而盖玻片是盖在被测标本之上的。黑龙江PAS染色方法

（1）*与肉瘤的鉴别：在网状纤维染色下可清楚显示出肉瘤每一个细胞周围有网状纤维围绕，或似为团状或巢状的瘤组织，但团巢内仍有破碎的网状纤维，*显示为明显巢或索状，巢内无网状纤维。

（2）骨基质与浓缩的分泌物、血浆或水肿液的鉴别：骨基质内有网状纤维，而后者无。

（3）炎症细胞与*细胞的鉴别：在支气管活检中有时挤压较重，一些深染的细胞挤压成团，难以判断是受挤压的炎症细胞。这种病例染网状纤维有利于鉴别，炎症细胞不成巢，小细胞*可有巢状或索状结构。 山西PAS染色切片镀银染色是神经元和神经纤维的主要染色法。

HE染色原理（2）脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。

由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。

胶原纤维染色：凡是间叶组织细胞都可产生网织纤维，也可产生胶原纤维，纤维母细胞是产生胶原纤维的主要细胞。胶原纤维是结缔组织中的主要纤维，是结缔组织中起支持作用的重要部分，具有一定的韧性和坚固性，能抵抗一定的牵引力而不致撕裂。胶原纤维是原胶原互相错开1/4平行排列交联成胶原原纤维，胶原原纤维再聚合成较宽的结构。按胶原的化学成分可分为15种，间质中的胶原纤维主要由I、Ⅱ、Ⅲ型胶原组成，新鲜时呈白色，故又称为白纤维。在HE染色中呈均一的粉红色，与周围间质区分不是很清楚。染色后，便可明显区别开来，易于观察病变时胶原纤维的变化。

应用：

（1）***硬化性疾病的观察：如肝硬变、心肌瘢痕的观察，胶原染色更易于观察诊断。

（2）瘢痕与淀粉样物质鉴别：前者胶原纤维染色为阳性，后者为阴性。

（3）骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别：利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱，纵横交错，后者较规则。 地衣红法：将HBsAg染色；HBsAg阳性呈棕色。

HE染色的试剂与仪器A：0.5~1%的伊红酒精溶液：

称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。

B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)

苏木精6g

无水乙醇100ml

硫酸铝钾150g

蒸馏水2000ml

碘酸钠1.2g

冰醋酸120ml

甘油900ml

配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，***加入冰醋酸和碘酸钠。

C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。 漂白法：将黑色素及嗜银细胞，胶原纤维双重染色；黑色素及嗜银细胞颗粒黑色，胶原纤维红色，背景淡黄。上海流式染色评价

Lendrum MSB法：将纤维蛋白，细胞核，红细胞多重染色；纤维蛋白红色，陈旧纤维蛋白紫色，细胞核蓝色。黑龙江PAS染色方法

四川扬克斯特为您介绍脂质染色：

脂肪和类脂统称为脂类，它是构成机体的正常成份，脂肪主要积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在于脂肪细胞胞浆内。因脂肪溶于酒精，故在HE染色中则被溶解掉，因此对某些疾病不能判断，所以必须进行脂肪染色。

应用：

（1）心、脑、肾等组织***的脂肪栓塞，脂肪染色即可判定栓子是否为脂肪滴。

（2）心脏、肝脏等脂肪变性：脂肪染色可显示变性细胞内的脂滴。

（3）脂肪肉瘤与其它间叶组织的恶性**的鉴别：脂肪染色即可显示脂肪肉瘤瘤细胞内产生的脂滴。 黑龙江PAS染色方法

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