细菌染色剂配方一、齐氏(Zieh1)石炭酸品红染液
甲液:取石炭酸5克,溶解在95毫升蒸馏水中。
乙液:取03克碱性品红,放入研钵中研磨,逐渐加入10毫升95%酒精,继续淹役,使它溶解。
将甲液和乙液混合后,摇匀,过滤,装瓶,备用。
配方二、罗氏(loffler's)美蓝染液
甲液:取S克美蓝,溶于100毫升95%6酒精中,制成美蓝一酒精饱和液。
乙液:取氢氧化钾0.01克(或1%氢氧化钾溶液1毫升),溶液也可用于放线菌染色,0.1%浓度可用于酵母菌染色。
配方三、革兰氏(Gram's)染液
用此液染色因先用甲液染色,再加乙液固定,丙液处理,***用丁液复染。四种液体的配方如下:
甲液:结晶紫液
(1)结晶紫2克95%酒精20升
(2)草酸铵0.8克蒸馏水80毫升
使用前将(1)、(2)液轻摇混匀,静置48小时后使用。
乙液:碘液
碘1克碘化钾2克蒸馏水300毫升
将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘,待碘全部溶解后,加水稀释至300毫升。
丙液:95%酒精溶液
丁液:番红花红液
2.5%番红花红酒精溶液10毫升蒸馏水100毫升。 油红染色法:将脂肪和细胞核双重染色;中性脂肪呈深橙红色,细胞核呈蓝色。山西HE染色方法
实验室常用人工染料:(1)人工染料:即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广。它们的缺点是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射,也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红是酸性染料,呈红色粉末状,能容于水,略溶于酒精(0.3%)。 他是良好的细胞制染色剂,在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染,能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。
2、刚果红
刚果红是酸性染料,呈枣红色粉末状,能溶于水喝酒精,遇酸呈蓝色。他能作染料,也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色,也可用作类淀粉染色,由于他能溶于水和酒精,所以洗涤和脱水处理要迅速。 吉林天狼星红染色结果爱先蓝法:将新型隐球菌夹膜染色;隐球菌呈蓝色。
席夫(Schiff's)试剂:
称取0.5克碱性品红,加到100 毫升煮沸的蒸馏水中,再微微加热5分钟,不断搅拌,使它溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤,滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重(亚硫酸钠)或无(水亚硫酸氢钠)。把溶液装入棕色试剂瓶内,摇荡后,塞紧瓶塞,放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时,加入0.5克活性炭,用力摇荡1分钟,过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内,塞紧瓶塞,滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光(瓶外用黑纸或暗盒遮光)。
如溶液变成红色,即失去染色能力。碱性品红是较强的核染色剂,在孚尔根氏(Feulgen's)反应中作为组织化学试剂,以检查DNA。
实验室常用人工染料(6)亚甲蓝或美蓝:
亚甲蓝或美蓝是碱性染料,呈蓝色粉末状,能溶于水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料,其优点是染色不会过深。
甲基绿:
甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是**有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。
用这些染料配备而成的染液有很多,例如:吕氏(Loeffer)碱性美蓝染液,齐氏(ziehl)石炭酸复红染液等。 三氯醋酸三氯化铁法:将胆色素和其他物质染色;胆色素绿色,其他呈复染的红色和黄色。
甲苯胺蓝染色法 :1. 甲苯胺蓝液
甲苯胺蓝0.5g蒸馏水定容至100ml
2. 冰醋酸液
冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml
染色步骤:
1.组织切片常规脱蜡至水
2.入甲苯胺蓝液30min
3.稍水洗
4.入冰醋酸液分化,直到胞核和颗粒清晰。
5.稍水洗,用冷风吹干
6.二甲苯透明,中性树胶封固
(二)
①切片脱腊至水。
②蒸馏水浸洗3次。
⑤0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。
④水洗,洗去多余染液。
⑤各级酒精脱水。
⑥二甲苯透明,中性树胶封固。
试剂的配制
称取0.1g甲苯胺蓝,溶于100ml 0.1M 醋酸盐缓冲液中,置室温5天后,即可使用染液于室温下可保存3个月,若放于4℃水箱则可保存半年左右,但该液的染色效果在早期为比较好,若染液存放时间较长,则染色偏淡,应适应延长染色时间。 切片中,载玻片是用来放被测标本的,而盖玻片是盖在被测标本之上的。北京天狼星红染色试剂
油红O脂肪法是显示组织内脂肪的染色方法,染料在脂肪内能高度溶解,可特异性的使组织内的中性脂肪着色。山西HE染色方法
四川扬克斯特为您介绍脂质染色:
脂肪和类脂统称为脂类,它是构成机体的正常成份,脂肪主要积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在于脂肪细胞胞浆内。因脂肪溶于酒精,故在HE染色中则被溶解掉,因此对某些疾病不能判断,所以必须进行脂肪染色。
应用:
(1)心、脑、肾等组织***的脂肪栓塞,脂肪染色即可判定栓子是否为脂肪滴。
(2)心脏、肝脏等脂肪变性:脂肪染色可显示变性细胞内的脂滴。
(3)脂肪肉瘤与其它间叶组织的恶性**的鉴别:脂肪染色即可显示脂肪肉瘤瘤细胞内产生的脂滴。 山西HE染色方法
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