四川扬克斯特为您介绍多色染色法示例：
（1）一、Mallory三色染色法（染结缔组织）
1.试剂配制
(1)重铬酸钾液
重铬酸钾2.5g;醋酸5m1，蒸馏水95ml
(2)苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100m1
(3)酸性复红液酸性复红0.5g，蒸馏水100ml
2.染色步骤
(1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
(2)重铬酸钾液10mino
(3)蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。
(4)酸性复红液2min,蒸馏稍洗。
(5)苯胺蓝液20min,95%乙醇快速分化。
(6)直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果
胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色:神经胶质纤维、
肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项
(1)酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。
(2)苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。
(3)对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。
(4)另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。 因脂肪溶于酒精，故在HE染色中则被溶解掉，因此对某些疾病不能判断，所以必须进行脂肪染色。湖南单色染色评价
在切片染色到封片之前的过程中，乙醇是一个特别常用的脱水脱二甲苯的试剂。在二甲苯中脱蜡不完全的切片组织进入到乙醇中能看到明显的蜡渣沉积会对试剂造成污染，也会影响***制成切片的效果，在操作过程中要特别注意。
二甲苯可以洗去切片组织上的蜡，蜡块是将组织包块后进行切片的必要物质；二甲苯也作为切片染色流程全部完成后，帮助透明让染色图像更加清晰的试剂。
染液的作用：让切片充分的着色，不同的染色方法所使用到的染液和染色时间也各不相同，一般按照自己对实验目的的需要来选用比较好的染色方法或多重染色方法。 天津流式染色评价普鲁士蓝法 反应显示三价铁染色结果：含铁血黄素蓝色，其他浅红色。
胶原纤维染色：凡是间叶组织细胞都可产生网织纤维，也可产生胶原纤维，纤维母细胞是产生胶原纤维的主要细胞。胶原纤维是结缔组织中的主要纤维，是结缔组织中起支持作用的重要部分，具有一定的韧性和坚固性，能抵抗一定的牵引力而不致撕裂。胶原纤维是原胶原互相错开1/4平行排列交联成胶原原纤维，胶原原纤维再聚合成较宽的结构。按胶原的化学成分可分为15种，间质中的胶原纤维主要由I、Ⅱ、Ⅲ型胶原组成，新鲜时呈白色，故又称为白纤维。在HE染色中呈均一的粉红色，与周围间质区分不是很清楚。染色后，便可明显区别开来，易于观察病变时胶原纤维的变化。
应用：
（1）***硬化性疾病的观察：如肝硬变、心肌瘢痕的观察，胶原染色更易于观察诊断。
（2）瘢痕与淀粉样物质鉴别：前者胶原纤维染色为阳性，后者为阴性。
（3）骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别：利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱，纵横交错，后者较规则。
神经原纤维呈细线状，存在于神经细胞体及树突中，它们形成一个稠密的网状，轴突中的原纤维也互相交织在一起，且伸延至轴突全长。在HE染色中呈粉红色，难与胶原纤维相区别，故须作神经纤维染色。
应用：
（1）有利于观察神经原纤维的损伤。
（2）神经系统**的鉴别与诊断：如神经母细胞瘤与未分化*的区别等。
细胞质染色剂配方一、伊红染液：伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。
(1)取1g伊红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%伊红水溶液(市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨水稀释液来代替本溶液)。
(2)取1g伊红，溶于99毫升70%酒精中，即成1%伊红-酒精溶液。
配方二、甲基蓝染液
取1g甲基蓝，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸馏水，即成1%甲基蓝染液。
配方三、亮绿染液
取0.5克亮绿，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%亮绿溶液。 地依红染色法：将弹力纤维、结缔组织，细胞核双重染色；弹力纤维呈深棕色，结缔组织浅棕色，细胞核蓝色。
显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的染色步骤：
(1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
(2)高锰酸钾硫酸液氧化3min后，自来水浸洗后，用2%草酸漂白2min.
(3)5%硫酸铁铵1min.
(4)Gomori氨性银改良液染1min.
(5)蒸馏水洗2次，用15%甲醛液还原1min.
(6)蒸馏水洗2次，氯化金30s，蒸馏水洗1次。
(7)70%乙醇浸一次，再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h.
(8)95%乙醇分化1min左右。
(9)浸入蒸馏水中1min后，用丽春红S染色液染色2min.
(10)直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹力纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色。
4.注意事项
氨性银液滴染时，要用干净吸管，防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒，应将蒸馏水冲洗切片上的银液，这样就不会使银液表面的银挥发.
颗粒而沉积在组织上。 中文名：特殊染色，应用：***硬化性疾病的观察，包括：网状纤维染色、弹力纤维染色等。天津流式染色评价
中文名：masson染色，释义：用两种或三种阴离子染料混合，作用：显示组织中纤维的染色方法。湖南单色染色评价
冷冻切片HE染色步骤:（1）冰冻切片固定10～30s
（2）稍水洗1～2s
（3）苏木**染色（60℃）30～60s
（4）流水洗去苏木**5～10s
（5）1%盐酸乙醇1～3s
（6）稍水洗1～2s
（7）促蓝液返蓝5～10s
（8）流水冲洗15～30s
（9）0.5%曙红液染色30～60s
（10）蒸馏水稍洗1～2s
（11）80%乙醇1～2s
（12）95%乙醇1～2s
（13）无水乙醇1～2s
（14）石炭酸二甲苯2～3s
（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s
（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s
（17）中性树胶封固
注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
注意事项：
切片脱水透明，切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。 湖南单色染色评价
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