天狼星红的染色法原理是什么?
原理利用胶原分子与强酸性染料天狼星红结合一起后加强双折光现象,使不同颜色和形态的胶原纤维得以区分。
胶原纤维(collagenousfiber)在三种纤维中数量**多,新鲜时呈白色,有光泽,故又名白纤维。在HE染色切片中呈嗜酸性,粗细不等,直径0.5~10um,呈波浪形,有分支并交织呈网,胶原纤维的生化成分为I型胶原蛋白。
胶原蛋白(collagen)由纤维细胞分泌,于细胞外聚合成胶原原纤维,经少量黏合成胶原纤维。胶原纤维是三种纤维中分布*****的一种纤维,***分布于各脏器内,它在皮肤、巩膜和肌腱**为丰富。
胶原纤维在上述的两种方法中着染不同的颜色,如V.G着染红色,Masson氏着染蓝色或绿色。
这主要取决于染料对组织的渗透、吸附、沉淀和反应,而染料分子量的大小是关键,分子量小的分子移动迅速,行动快,对组织的渗透性较强,能穿透较为致密的组织。 LiLLie亚铁反应法:将黑色素,肌纤维双重染色;黑色素暗绿色,背景浅绿或不着色,肌纤维和背景黄色。福建PAS染色切片
显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的试剂配制:
(1)高锰酸钾硫酸液高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。
(2)维多利亚蓝染色液维多利亚蓝2g,糊精0.5g,间苯二酚4g;蒸馏水200ml。
将上述物质混合后加热煮沸,边煮边搅拌,约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml,另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min,不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤,将滤纸上的残渣连同滤纸放在60℃恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末,再溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。
(3)丽春红染色S染色液
丽春红S水溶液15ml,苦味酸饱和水溶液85ml。
(4)Gomori氨性银改良液取5%硝酸银水溶液5ml,滴加浓氨水由棕黑色变清为止,再加入3%氢氧化钠水溶液5ml,此时该液突变紫黑色,这时再加入氨水使之变清晰为止。***用蒸馏水补足至50ml,盛棕色试剂瓶中,置于冰箱中备用较长时间。 天津PAS染色方法衰老的细胞由于代谢缓慢或停止,不能使美蓝还原,所以呈蓝色或者淡蓝色。
糖类染色:
糖类从组织化学技术角度来分,可分为多糖、中性粘液物质、酸性粘液物质、粘蛋白及粘脂质。多糖主要指糖原,它是一种胶样液态存在于肝细胞、骨骼肌、心肌等处。因糖原在肝脏及心肌疾患及某些**的病变中分布和量都有一定改变,故糖原的染色在临床病理诊断上具有重要意义。
(1)肝及心肌糖原沉着症的诊断:糖原染色显示在肝或心肌细胞内有大量糖原存在即可确诊。
(2)糖尿病性肾小球硬化症或血管病的诊断。
(3)高雪氏病与尼曼——匹克氏病的鉴别:前者为阳性、后者为阴性,做此染色较易鉴别。
(4)骨内骨外尤文氏肉瘤的诊断:此瘤80%细胞内有较多糖原,糖原染色为阳性,所以糖原染色为阳性(大多数细胞)可以协助诊断。
(5)腺泡状软组织肉瘤与化感瘤:前者棒状小体糖原染色为阳性。
(6)间皮瘤或滑膜肉瘤与其它*的鉴别:前者分泌含透明质酸的粘液,糖原染色为阳性,但透明质酸酶消化后即呈阴性反应,如有此染色特点,即可有助于诊断滑膜肉瘤或间皮瘤而不是*。
线粒体染色剂:
配方一、詹钠斯绿B(Janu’s green酒精饱和溶液)
取125毫升詹钠斯绿B,加入到625毫升无水酒精中,搅拌,即成烟鲁绿B酒精饱和染液。
(1)取詹钠斯绿酒精饱和染液按1: 30000比例加蒸馏水稀释,用来染原生动物线粒体。
(2)取詹钠斯绿酒精饱和液,按1: 1000比例加蒸馏水稀释,用来染新鲜蛙血线粒体。
配方二、詹钠斯绿B中性红染液
先配制詹钠斯绿B和中性红酒精包和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法:
取125毫升中性红,加入到50毫升无水酒精中,搅拌。
在10毫升生理盐水(两栖类生理盐水浓度为0.65%;哺乳类生理盐水浓度为0.9%)中,加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7~1毫升,中性红酒精饱和液2毫升,混合。詹钠斯绿B稀释液是***染液。 透明骨骼标本染色剂配方一:茜素红染液(Ⅰ) 取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。
四川扬克斯特为您介绍多色染色法示例:
(1)一、Mallory三色染色法(染结缔组织)
1.试剂配制
(1)重铬酸钾液
重铬酸钾2.5g;醋酸5m1,蒸馏水95ml
(2)苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g,桔黄G2g,磷钨酸1g,蒸馏水100m1
(3)酸性复红液酸性复红0.5g,蒸馏水100ml
2.染色步骤
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(2)重铬酸钾液10mino
(3)蒸馏水冲洗2min,蒸馏水2次。
(4)酸性复红液2min,蒸馏稍洗。
(5)苯胺蓝液20min,95%乙醇快速分化。
(6)直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原和网状纤维呈蓝色,软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色:神经胶质纤维、
肌纤维和酸性颗粒呈红色,髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项
(1)酸性复红液易溶解于水,肉眼观察切片上保留一定的红色。
(2)苯胺蓝液染色后,用95%乙醇分化时,须用显微镜观察掌握。
(3)对陈旧的固定标本,其染色效果较差,可增加染色时间。
(4)另张切片,可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。 masson染色用来显示组织中纤维以及炎性因子的染色方法之一。天津油红染色质量
透明骨骼标本染色剂配方二:茜素红溶液(Ⅱ) 取1克茜素红,溶于100毫升95%酒精,搅拌成深紫色的茜素红染液。福建PAS染色切片
弹力纤维染色应用:
(1)动静脉的辨认:在血管病变时是动脉还是静脉以及是否为血管壁难辨认时,弹力纤维染色有助于辨认。有弹力板者为动脉,有弹力纤维构成血管轮廓者为血管。弹力纤维抗损伤能力较强,故弹力性纤维构成血管轮廓不易损坏。
(2)弹力纤维瘤的诊断:弹力纤维染色可见瘤样病变内有大量弹力纤维增生,非真性**。
(3)心血管先天性弹力组织增生,这组疾病有先天性内膜炎及冠状动脉的弹力纤维组织增生。弹力纤维染色有助于诊断。
(4)弹力纤维损伤性疾病:这组疾病有肺气肿、***、大动脉中层炎症等,弹力纤维染色有助于这些疾病的观察诊断。
(5)一些与弹力纤维变化有关的皮肤疾病的诊断与鉴别诊断:这组疾病有皮肤松弛症,萎缩性硬化性苔藓等,其诊断与鉴别诊断常依赖于弹力纤维染色,以观察弹力纤维变化。 福建PAS染色切片
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