常规HE染色步骤:
A.二甲苯(Ⅰ)15min
B.二甲苯(Ⅱ)15min
C.二甲苯:无水乙醇=1:12min
D.100%乙醇(Ⅰ)5min
E.100%乙醇(Ⅱ)5min
F.80%乙醇5min
G.蒸馏水5min
H.苏木**染色5min
I.水洗10min或流水冲洗5min
J.1%盐酸乙醇30s
K.水洗30s
L.蒸馏水过洗5s
M.0.5%伊红液染色1-3min
N.蒸馏水稍洗30s
O.80%乙醇稍洗30s
P.95%乙醇(Ⅰ)1min
Q.95%乙醇(Ⅱ)1min
R.无水乙醇(Ⅰ)3min
S.无水乙醇(Ⅱ)3min
T.二甲苯(Ⅰ)3min
U.二甲苯(Ⅱ)3min
V.中性树胶封固 中文名:特殊染色,应用:***硬化性疾病的观察,包括:网状纤维染色、弹力纤维染色等。上海PAS染色原理
吸虫染色剂
梅耶氏(Mayer' s )明矾-洋红染液
取铵明矾(硫酸铝铵) 5克,溶于95毫升蒸馏水中,再加入0.5克洋红酸,加热溶解,冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂,如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚(石炭酸)等,以防生霉。
这种染液适合于染小型动物材料,如吸虫等寄生虫的整体,也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。
***染色剂
配方一、中性红染液.
先配成1%中性红水溶液(1克中性红溶于100毫升蒸馏水中)。取这种溶液1毫升,用0.6%生理盐水(或蒸馏水)稀释到50毫升,即成0.02%中性红水溶液,贮存在棕色瓶里,放在黑暗处。
本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。
配方二、尼罗蓝(Nile Blue)染液
取0.1克尼罗蓝,溶解于1000~1500毫升蒸馏水中,即成尼罗蓝染液。
这种染液能把原生动物大核染成绿色,食物泡染成蓝色。
配方三、亚甲蓝染液
取0.1克亚甲蓝,溶解于1000毫升蒸馏水中,即成亚甲蓝染液。
这种染液用于原生动物的***染色。 天津双色染色步骤伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
线粒体染色剂:
配方一、詹钠斯绿B(Janu’s green酒精饱和溶液)
取125毫升詹钠斯绿B,加入到625毫升无水酒精中,搅拌,即成烟鲁绿B酒精饱和染液。
(1)取詹钠斯绿酒精饱和染液按1: 30000比例加蒸馏水稀释,用来染原生动物线粒体。
(2)取詹钠斯绿酒精饱和液,按1: 1000比例加蒸馏水稀释,用来染新鲜蛙血线粒体。
配方二、詹钠斯绿B中性红染液
先配制詹钠斯绿B和中性红酒精包和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法:
取125毫升中性红,加入到50毫升无水酒精中,搅拌。
在10毫升生理盐水(两栖类生理盐水浓度为0.65%;哺乳类生理盐水浓度为0.9%)中,加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7~1毫升,中性红酒精饱和液2毫升,混合。詹钠斯绿B稀释液是***染液。
脂肪染色剂
苏丹Ⅲ染液
取0.1克苏丹Ⅲ,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%苏丹Ⅲ染液。
这染液能染脂肪,还能染木栓、角质层。
血液染色剂
配方一、瑞氏 (Wright's)染液
取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内,加少量甲醇研磨,使染料溶解,然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存,即可使用。
新鲜配制的染液偏碱性,放置后呈酸性,染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4~6.8。因此,染色时加入缓冲液,可维持一定的酸碱度,使染色效果更好。
这种染液除能染血液,还能染疟原虫。
瑞氏染料可以自制。在100是升05%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝,溶解后放在锅内,蒸上1小时,取出冷却后过滤在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升。随加、随搅拌,使混合液呈紫色。
静置一夜后,用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物,在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后研磨成粉末,即成瑞氏染料。
配方二、甲基紫染液
取甲基紫0.5克,加到100毫升生理盐水中,溶解后加入冰醋酸0.02毫升。 masson染色用来显示组织中纤维以及炎性因子的染色方法之一。
实验室常用人工染料(6)亚甲蓝或美蓝:
亚甲蓝或美蓝是碱性染料,呈蓝色粉末状,能溶于水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料,其优点是染色不会过深。
甲基绿:
甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是**有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。
用这些染料配备而成的染液有很多,例如:吕氏(Loeffer)碱性美蓝染液,齐氏(ziehl)石炭酸复红染液等。 高碘酸复红法:将***和红细胞双重染色;***紫红色,红细胞浅黄色。北京PAS染色步骤
甲醇刚果红法:将淀粉样物,细胞核双重染色;淀粉样物紫红色,细胞核蓝色。上海PAS染色原理
色素染色(含铁血黄素及黑色素):
含铁血黄素是由漏出于血管外的红细胞,被巨噬细胞吞噬后,分解血红蛋白产生的颗粒,HE染色为棕黄色,故称为含铁血黄素。因有时与福尔马林沉渣及黑色素等难相区别,故做含铁血黄素染色。
应用:
主要用于同其它色素鉴别,若为阳性,显示陈旧性出血。黑色素常见于皮肤色素细胞,恶性黑色素瘤常可产生黑色素。组织内大量存在时呈棕黑色,易于鉴别。但少量存在时便难与其它色素相鉴别,须作黑色素染色。
黑色素瘤的诊断与鉴别诊断:**细胞内色素是否为黑色素,染黑色素有助于确定黑色素性质及**的定性诊断。
血色病与黑便病:皮革内有色素沉着,黑色素阴性而含铁血黄素阳性者可能为前者。 上海PAS染色原理
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