HE染色原理(1)易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia);而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。
构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为ph6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,ph值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;ph值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的ph值可以影响染色的反应。银氨染色法:将网状纤维,胶原纤维双重染色;网状纤维呈黑色,胶原纤维呈红色,背景呈黄色。湖南masson染色上机
在切片染色到封片之前的过程中,乙醇是一个特别常用的脱水脱二甲苯的试剂。在二甲苯中脱蜡不完全的切片组织进入到乙醇中能看到明显的蜡渣沉积会对试剂造成污染,也会影响***制成切片的效果,在操作过程中要特别注意。
二甲苯可以洗去切片组织上的蜡,蜡块是将组织包块后进行切片的必要物质;二甲苯也作为切片染色流程全部完成后,帮助透明让染色图像更加清晰的试剂。
染液的作用:让切片充分的着色,不同的染色方法所使用到的染液和染色时间也各不相同,一般按照自己对实验目的的需要来选用比较好的染色方法或多重染色方法。 安徽多色染色方法Lendrum MSB法:将纤维蛋白,细胞核,红细胞多重染色;纤维蛋白红色,陈旧纤维蛋白紫色,细胞核蓝色。
显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的试剂配制:
(1)高锰酸钾硫酸液高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。
(2)维多利亚蓝染色液维多利亚蓝2g,糊精0.5g,间苯二酚4g;蒸馏水200ml。
将上述物质混合后加热煮沸,边煮边搅拌,约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml,另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min,不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤,将滤纸上的残渣连同滤纸放在60℃恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末,再溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。
(3)丽春红染色S染色液
丽春红S水溶液15ml,苦味酸饱和水溶液85ml。
(4)Gomori氨性银改良液取5%硝酸银水溶液5ml,滴加浓氨水由棕黑色变清为止,再加入3%氢氧化钠水溶液5ml,此时该液突变紫黑色,这时再加入氨水使之变清晰为止。***用蒸馏水补足至50ml,盛棕色试剂瓶中,置于冰箱中备用较长时间。
糖类染色:
糖类从组织化学技术角度来分,可分为多糖、中性粘液物质、酸性粘液物质、粘蛋白及粘脂质。多糖主要指糖原,它是一种胶样液态存在于肝细胞、骨骼肌、心肌等处。因糖原在肝脏及心肌疾患及某些**的病变中分布和量都有一定改变,故糖原的染色在临床病理诊断上具有重要意义。
(1)肝及心肌糖原沉着症的诊断:糖原染色显示在肝或心肌细胞内有大量糖原存在即可确诊。
(2)糖尿病性肾小球硬化症或血管病的诊断。
(3)高雪氏病与尼曼——匹克氏病的鉴别:前者为阳性、后者为阴性,做此染色较易鉴别。
(4)骨内骨外尤文氏肉瘤的诊断:此瘤80%细胞内有较多糖原,糖原染色为阳性,所以糖原染色为阳性(大多数细胞)可以协助诊断。
(5)腺泡状软组织肉瘤与化感瘤:前者棒状小体糖原染色为阳性。
(6)间皮瘤或滑膜肉瘤与其它*的鉴别:前者分泌含透明质酸的粘液,糖原染色为阳性,但透明质酸酶消化后即呈阴性反应,如有此染色特点,即可有助于诊断滑膜肉瘤或间皮瘤而不是*。 甲醇刚果红法:将淀粉样物,细胞核双重染色;淀粉样物紫红色,细胞核蓝色。
HE染色结果的判断细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。
着***况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。
HE染色评定标准:
(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕;
(2)染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观。 HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中**基本、使用*****的技术方法。云南多色染色效果
衰老的细胞由于代谢缓慢或停止,不能使美蓝还原,所以呈蓝色或者淡蓝色。湖南masson染色上机
神经原纤维呈细线状,存在于神经细胞体及树突中,它们形成一个稠密的网状,轴突中的原纤维也互相交织在一起,且伸延至轴突全长。在HE染色中呈粉红色,难与胶原纤维相区别,故须作神经纤维染色。
应用:
(1)有利于观察神经原纤维的损伤。
(2)神经系统**的鉴别与诊断:如神经母细胞瘤与未分化*的区别等。
细胞质染色剂配方一、伊红染液:伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。
(1)取1g伊红,溶于99毫升蒸馏水中,即成1%伊红水溶液(市售红墨水内含伊红成分,可以用红墨水稀释液来代替本溶液)。
(2)取1g伊红,溶于99毫升70%酒精中,即成1%伊红-酒精溶液。
配方二、甲基蓝染液
取1g甲基蓝,溶于29毫升70%酒精中,加入70毫升蒸馏水,即成1%甲基蓝染液。
配方三、亮绿染液
取0.5克亮绿,溶解在100毫升蒸馏水中,即成0.5%亮绿溶液。 湖南masson染色上机
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