席夫(Schiff's)试剂:
称取0.5克碱性品红,加到100 毫升煮沸的蒸馏水中,再微微加热5分钟,不断搅拌,使它溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤,滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重(亚硫酸钠)或无(水亚硫酸氢钠)。把溶液装入棕色试剂瓶内,摇荡后,塞紧瓶塞,放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时,加入0.5克活性炭,用力摇荡1分钟,过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内,塞紧瓶塞,滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光(瓶外用黑纸或暗盒遮光)。
如溶液变成红色,即失去染色能力。碱性品红是较强的核染色剂,在孚尔根氏(Feulgen's)反应中作为组织化学试剂,以检查DNA。 伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。北京单色染色结果
四川扬克斯特科技为您介绍HE染色法:苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining),简称HE染色法,石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性,伊红为酸性染料。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中**基本、使用*****的技术方法。
相关染液:苏木素,伊红
常用测量:面积测量,肠绒毛测量
病理诊断:病理描述,病理评分
染色效果:主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色,细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 陕西HE染色原理衰老的细胞由于代谢缓慢或停止,不能使美蓝还原,所以呈蓝色或者淡蓝色。
HE染色结果的判断细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。
着***况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。
HE染色评定标准:
(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕;
(2)染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观。
多色染色法示例:Masson三色染色法
1.试剂配制
(1)Masson复合染色液
酸性复红1g,丽春红2g,桔黄G2g,醋酸300ml。
(2)亮绿染色液高绿SF0.1g,醋酸100ml。
2.染色步骤
中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(1)Masson复合染色液5min。
(2)醋酸水溶液稍洗。
(3)5%磷钨酸5-10min。
(4)醋酸水溶液浸洗2次。
(5)亮绿染色液5min,醋酸水洗2次。
(6)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈绿色,肌纤维呈红色,红细胞呈桔红色。
4.注意事项
(1)Masson复合染色液,经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
(2)亮绿染料可用苯胺蓝替换,可用来作为对比观察染色的效果。 甲基紫染色法:将淀粉样物,细胞核双重染色;淀粉样物红色或紫红色。细胞核蓝色。
实验室常用人工染料(4)结晶紫:
结晶紫是碱性染料,能溶于水(溶解度9%)和酒精(溶解度8.75%)。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广,是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的,用来显示染色体的中心体,并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时,用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色,染色体染成红色,纺锤丝染成紫色,所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛,效果也很好。用结晶紫染色的切片,缺点是不易长久保存。
龙胆紫:
龙胆紫是混合的碱性染料,主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是,龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫***,主要成分是甲基紫,需要时能代替龙胆紫和结晶紫。 砂罗铬花青法:髓鞘呈鲜蓝色,细胞核呈深蓝色,胶原纤维呈粉红色。江苏阿利新蓝染色结果
苏木素VG法:细胞灰黑色,髓鞘灰白色,胶原红色,肌纤维黄色,***细胞浆琥珀黄色,胶质纤维琥珀色。北京单色染色结果
实验室常用天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木(热带豆科植物)干枝中用**浸制出来的一种色素,是**常用的染料之一。苏木精不能直接染色,必须暴露在通气的地方,使他变成氧化苏木精(又叫苏木素)后才能使用,这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长,配置后时间愈久,染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体,易溶于酒精,微溶于水和甘油,是染细胞核的优良材料,他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异,用酸性溶液(如盐酸-酒精)分化后呈红色,水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色,水洗后呈蓝黑色。2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后,磨成粉末,提取出虫红,再用明矾处理,除去其中杂质,就制成洋红。单纯的洋红不能染色,要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸,碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料,染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜,尤其适宜于小型材料的整体染色。 北京单色染色结果
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