无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。
有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。
研究者可根据样品的粘稠程度，以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便达到更好的得率和操作体验。
样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管，请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度，可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。 超滤浓缩管的优点有很多。无锡默克超滤浓缩管代理商
蛋白亲和纯化（无需换液和浓缩）
* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管～1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法，但溶液体积和离心时间等需要略加优化。
3次低速离心，总耗时~75分钟（含60分钟孵育时间）
1. 在Amicon® Pro上样池中加入至多1000μL亲和纯化树脂（沉降的柱床体积）和至多9 mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1 min平衡树脂。（柱床）树脂量≥ 500μL时采用2,000×g离心4 min。
2. 加入至多9 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h*，其间可温和搅动促进结合。 静安区默克0.5ml超滤浓缩管报价上海超滤浓缩管批发商。
大体积样品浓缩
Centricon® Plus-70离心浓缩装置
用于15-70mL生物溶液的快速浓缩等操作。70mL的样品在25分钟内浓缩至350μL；死体积设计确保样品不会被离干而损失。依起始材料不同、起始体积不同，样品可被浓缩50-200倍。低吸附竖向再生纤维素超滤膜及双超滤柱设计，加快处理速度；反转离心操作进一步使宝贵的浓缩样品回收率得以提高。这个产品替代传统的透析、冻干、沉淀或搅拌式浓缩等技术和方法，是非常方便的工具。
特别推荐的应用：
色谱洗脱产物的浓缩和脱盐
单克隆抗体浓缩
培养上清中蛋白和***的浓缩
组织匀浆液和细胞裂解液澄清
浓度：当需要截留的样品浓度很低时，通量通常不受浓度影响。操作过
程中，随着溶质浓度的升高，增加的粘滞性和极化将导致通量降低。
温度：粗体，作为获得压力、浓度一样的词条通常增加操作时的温度可
以提高超滤效率。每增加 1℃蛋白扩散率增加 3-3.5%，同时溶液粘度降低。
实践中一般是以样品和设备能耐受的比较高温度来操作。
pH：改换溶液和 / 或 pH 常常改变分子结构，蛋白尤其如此。在蛋白的 pI
值蛋白会沉淀，产生堵塞和得率损失。
污垢：溶液中除了目的分子造成的浓差极化，还有其它小颗粒和分子会
在膜上富集和沉淀，逐渐堆积在膜孔上或膜孔结构中，形成结晶和沉淀。 益启生物公司的 超滤浓缩管系列有很多。
上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。
6. 加入1 mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5 min。
7. 4,000×g离心15 min。
8. 加上蛋白样品**终需要的缓冲液1.5 mL。4,000×g离心15 min，置换缓冲液的同时进行浓缩。
9. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管，1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。
* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管～1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法，但溶液体积和离心时间等需要略加优化。
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用超滤对分子进行分级
通过选定截留分子量的超滤操作能精确地将混在大分子中的小分子去
除的想法常常不切实际。事实上，膜的规格描述是基于截留而非通过
的性质。一项实验中，采用 100k NMWL 滤膜，大于 100kDa 的分子截
留率 >90%，但这时比膜孔径小的分子并不是完全自由地通过滤膜，
75kDa 的分子截留率为 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的
溶液中的各 种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实
践中，如果要分离两种大分子，它们之间的分子量差异应该达到 10 倍
以上，或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间，则可达到比较理想的
分离。如果蛋白溶液较为稀释，低压下操作也有助于达到更好的效果。 无锡默克超滤浓缩管代理商
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