T5核酸外切酶在基因克隆中的优势主要体现在以下几个方面:1.**高效性**:T5核酸外切酶依赖性组装(TEDA)方法在常规克隆中的效率与使用专有DNA聚合酶的商业In-Fusion方法相似,但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA连接酶的Gibson方法。2.**低成本**:TEDA方法每个反应使用0.04U的T5核酸外切酶,价格为0.25美分,具有很高的成本效益。3.**简单性**:TEDA方法的反应混合物非常简单,易于操作,这使得它在预算有限的实验室中尤其有用。4.**灵活性**:TEDA方法能够组装多个DNA片段,并在多个位点同时进行定点诱变,提供了一种灵活的克隆和突变方法。5.**阳性克隆率**:使用T5核酸外切酶的无缝克隆技术可以确保100%的阳性克隆率,这提高了实验的成功率。6.**协同作用**:在无缝克隆中,T5核酸外切酶与Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA连接酶协同作用,通过切割、填补和连接三个步骤,高效地完成DNA片段的连接。7.**减少污染**:T5核酸外切酶可以降解碱裂解提取质粒中的变性DNA,减少超螺旋DNA的污染,提高DNA克隆和转染效率。这些优势使得T5核酸外切酶成为基因克隆中一个非常有价值的工具,尤其是在需要高效、低成本和操作简便的实验环境中。在泛素化过程中,首先泛素激起酶E1(Uba1或其他)在ATP的存在下激起泛素分子,形成E1-泛素硫酯中间体。Recombinant Human MICA alpha 3 Protein,mFc Tag

为了确保PCR实验中BstDNAPolymeraseI的活性比较大化,以下是一些关键的优化措施:1.**反应缓冲液**:使用适合BstDNAPolymeraseI的反应缓冲液,如NEB提供的IsothermalAmplificationBufferIIPack,该缓冲液包含Tris-HCl、(NH4)2SO4、KCl、MgSO4和Tween®20,pH值为8.8,专为等温扩增设计。2.**反应条件**:BstDNAPolymeraseI的比较好反应温度通常在65°C左右。确保PCR仪能够精确控制并保持这一温度,以保证酶的活性和稳定性。3.**酶的浓度**:根据反应体系的需要调整BstDNAPolymeraseI的用量。过多的酶可能导致非特异性扩增,而过少则可能降低扩增效率。通常,一个单位的酶能够在65°C下,30分钟内将25nmol的dNTP掺入酸不溶性物质。4.**Mg2+浓度**:Mg2+是DNA聚合酶活性的关键辅因子。其浓度对PCR反应有影响,需要根据具体情况调整Mg2+浓度,以获得比较好的扩增效果。5.**dNTPs浓度**:dNTPs是DNA合成的基础原料,其浓度约为200-300μM较为适宜。过高会增加非特异性扩增。6.**引物设计**:设计特异性引物,通常长度为18-30个碱基,Tm(熔解温度)相近,以保证同时退火。7.**模板DNA的质量和纯度**:确保模板DNA无蛋白质、RNA和其他杂质的污染,这些杂质可能会抑制酶的活性。Recombinant Human sTRAILR2/TNFRSF10B Protein泛素化蛋白随后被靶向到26S蛋白酶体进行降解,或出现蛋白位置或活性变化。

BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一种利用磁珠技术从血液中提取基因组DNA的试剂盒。以下是一些关键特点和应用:1.**高效提取**:该试剂盒采用特殊的磁珠和缓冲体系,能够快速且高效地从100μl至1ml的血液中分离和纯化高质量的基因组DNA。2.**磁珠特性**:独特的磁珠具有很强的核酸亲和力,在特定条件下可以快速分离和纯化核酸。这些磁珠对磁场响应迅速,使得提取过程既安全又便捷。3.**提取过程**:血液样本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,释放出的基因组DNA与磁珠特异性结合。通过磁分离架的作用,磁珠与溶液快速分离,经过洗涤去除杂质,用洗脱液将基因组DNA从磁珠上洗脱下来。4.**应用广**:提取的基因组DNA可用于多种分子生物学实验,如PCR扩增、酶切、基因分型、Southern杂交、高通量测序、基因组DNA文库构建等。5.**操作简便**:整个抽提过程大约需要50分钟,操作简便,无需使用有毒有害的有机试剂,如酚或氯仿,提高了实验的安全性。6.**高纯度和高回收率**:提取的DNA纯度高,A260/A280通常在1.7-1.9之间,表明蛋白和RNA的污染低。回收率通常超过80%。
牛痘DNA拓扑异构酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)与细菌DNA拓扑异构酶的主要区别如下:1.**来源不同**:-牛痘DNA拓扑异构酶I来源于牛痘病毒,是一种真核生物病毒中的酶。-细菌DNA拓扑异构酶则来源于原核生物,如大肠杆菌的ω蛋白等。2.**功能特性**:-牛痘DNA拓扑异构酶I能够解旋DNA的超螺旋结构,并且识别并切割双链DNA末端[5’C(T)CCTT],与DNA形成共价连接形成稳定复合物,遇到DNA的5’-OH基团后,重新连接形成完整DNA链。-细菌DNA拓扑异构酶,如大肠杆菌的ω蛋白,主要功能是催化DNA链断开和结合的偶联反应,以改变DNA的拓扑结构。3.**活性条件**:-牛痘DNA拓扑异构酶I即使在Mg2+不存在的条件下也显示活性。-细菌DNA拓扑异构酶可能需要Mg2+等金属离子作为辅因子来发挥活性。4.**作用的DNA链**:-牛痘DNA拓扑异构酶I能使正负两方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由来的DNA拓扑异构酶I只作用负链的超螺旋分子。5.**共价键形成**:-牛痘DNA拓扑异构酶I与DNA形成共价连接,此酯键中所贮存的能量可能在切断端的再结合上起着作用。-细菌DNA拓扑异构酶在原核生物中是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键。
泛素分子可以通过其内部的赖氨酸残基与其他泛素分子形成多聚泛素链,这一步骤通常由E3酶催化。

BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一种来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的DNA聚合酶。这种酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性,但缺失了5'-3'核酸外切酶结构域,因此它具有链置换活性,可以用于重组酶聚合酶扩增(RPA)等恒温扩增技术。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些关键特性和应用:1.**活性定义**:在37°C条件下,30分钟内将10nmol的dNTP掺入酸不溶性物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。2.**热失活条件**:75°C,20分钟。3.**酶保存液成分**:25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**储存条件**:-25~-15°C保存,有效期2年。5.**注意事项**:-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性,BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配对的突出末端,因而不适用于生成平齐末端。-25°C时BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性,是同温度下Klenow片段(3'-5'exo-)的两倍。6.**应用**:-随机引物法标记。-cDNA第二条链的合成。-单个dA的加尾。-链置换的DNA合成。Cas12a同源物能够识别更简单的PAM序列(如5-TTN),这使得基因组的覆盖率显著提高。BDC2.5 mimotope 1040-51
Uracil-DNA Glycosylase (UDG) 是一种在DNA修复过程中起作用的酶,其主要功能是识别并去除DNA中的尿嘧啶碱基。Recombinant Human MICA alpha 3 Protein,mFc Tag
磁珠法质粒小量抽提试剂盒是一种利用磁性纳米颗粒固相核酸富集技术来纯化质粒DNA的产品。它通常包括高性能纳米磁珠和独特的缓冲体系组合,通过裂解菌体后释放的DNA,能够有效地结合于磁珠表面,漂洗除杂后获得高质量的目的质粒。以下是磁珠法质粒小量抽提试剂盒的一些主要特点和应用:1.**快速简便**:操作步骤简单,无需多次离心,整个抽提过程通常只需20-25分钟。2.**高得率和纯度**:可以从1-5ml新鲜大肠杆菌菌液中分离纯化2-20µg高质量的质粒DNA。纯化得到的DNA质量高,完整性好,OD260/280比值一般为1.8~1.9之间,OD260/230比值大于2.0。3.**适用性广**:适用于1-5mL小体积高通量菌液质粒抽提,且抽提所得的质粒DNA可直接用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。4.**自动化兼容**:可整合移液法自动化仪器和磁棒法自动化仪器进行高通量提取实验。5.**安全性高**:操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂,更加环保和安全。6.**成本效益**:相比传统的离心柱法,磁珠法可以减少离心次数,获得完整性更好的质粒,且操作更为简便快捷。7.**操作灵活**:磁珠的使用量可灵活调节,适合不同体积和浓度的样品处理。Recombinant Human MICA alpha 3 Protein,mFc Tag
在分子生物学研究中,RNA的完整性分析是评估RNA质量和功能的重要环节。10×RNALoadingBuffer作为一种高效、便捷的上样缓冲液,在RNA电泳实验中发挥着不可或缺的作用。本文将详细介绍10×RNALoadingBuffer的产品特点和性能。一、产品特点高浓度设计10×RNALoadingBuffer是一种10倍浓缩的上样缓冲液,使用时需稀释至1×。这种高浓度设计减少了试剂的使用量,同时保证了样品在电泳过程中的稳定性和均匀性。示踪染料的双重指示该缓冲液含有溴酚蓝(BromophenolBlue)和二甲苯青(XyleneCyanolFF)两种示踪染料。溴酚蓝在1.2%甲醛变性琼脂糖凝胶...