Recombinant Mouse FAM3D Protein

提高SpCas9蛋白在基因编辑中的特异性和效率是CRISPR-Cas9技术发展的关键。根据新的研究进展，以下是一些提高SpCas9特异性和效率的策略：1.**工程化改造**：通过定向进化和蛋白工程的方法，研究人员可以对SpCas9进行改造，以提高其在细胞中的基因编辑活性。例如，JenniferDoudna团队开发的工程化iGeoCas9，通过在WED结构域引入突变，显著提高了基因编辑效率，比野生型GeoCas9高出100倍以上。2.**优化gRNA设计**：合理设计的gRNA可以提高Cas9的特异性，减少脱靶效应。研究人员通过生物信息学工具和实验验证，筛选出与目标DNA序列互补性更强且特异性更高的gRNA。3.**使用高保真Cas9变体**：研究人员开发了高保真Cas9变体，这些变体在保持编辑活性的同时，降低了脱靶风险。例如，通过突变Cas9蛋白的关键氨基酸残基，可以减少其在非目标位点的切割活性。4.**PAM序列的优化**：通过改变Cas9蛋白的PAM序列识别能力，可以扩大其靶向范围，从而提高编辑效率。例如，开发能够识别非典型PAM序列的Cas9变体。5.**递送系统的优化**：使用核糖核的蛋白（RNP）复合物的形式递送Cas9和gRNA，可以提高Cas9蛋白的稳定性和编辑效率。这种方法避免了mRNA或质粒递送可能引起的免疫反应。来源于 Thermococcus kodakaraensis，具有高热稳定性和校正能力，适用于长片段PCR和热启动PCR。Recombinant Mouse FAM3D Protein,hFc Tag

N末端His标签的泛素蛋白（RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB）是一种经过遗传工程改造，在其N末端融合了His标签的泛素蛋白。以下是这种蛋白的一些特点：1.**His标签**：N末端His标签是一种常见的融合标签，用于提高蛋白质的可溶性和便于通过亲和层析进行纯化。His标签通常由6到10个组氨酸（His）组成。2.**重组表达**：这种泛素蛋白通常在大肠杆菌（E.coli）或其他宿主细胞中通过重组DNA技术表达。3.**高度保守**：泛素蛋白是一个76个氨基酸残基的多肽，在真核生物中高度保守。4.**分子量**：由于N末端添加了His标签，重组泛素蛋白的分子量会略大于天然泛素（约8.5kDa）。5.**纯度**：重组泛素蛋白通常具有高纯度（>95%bySDS-PAGE），适合用于各种生物化学和分子生物学实验。6.**溶解性**：His标签的添加可以提高蛋白质在水溶液中的溶解性，便于实验操作。7.**稳定性**：冻干粉形式的重组泛素蛋白在-25~-15℃保存，具有较长的有效期，通常为一年。8.**应用广**：N末端His标签的泛素蛋白可用于多种实验，包括蛋白质泛素化、E3泛素连接酶活性测定、蛋白质相互作用研究等。Recombinant Mouse GPA33/A33 Protein,His Tag在基因编辑中，Pfu DNA Polymerase 可用于目的基因或编辑工具的克隆，减少克隆过程中的非目标突变。

PNGaseF（肽-N-糖苷酶F）是一种普遍使用的酶，它可以从N-连接糖蛋白中去除几乎所有类型的N-连接糖链。其活性和稳定性可能会在不同的pH条件下发生变化。根据NEB（NewEnglandBiolabs）提供的PNGaseF产品信息，PNGaseF的好的活性和稳定性pH为7.5。在pH7.5时，PNGaseF的活性可以达到100%。然而，酶在不同温度下的活性表现也有所不同：在37°C时活性为100%，在30°C时也保持100%，而在23°C时活性下降到65%，17°C时为40%，在3°C时几乎无活性。这表明PNGaseF的活性随温度降低而下降，尽管pH值对酶活性有重要影响，但温度也同样是一个重要因素。此外，PNGaseF的活性会受到SDS的抑制，因此在变性条件下进行酶切时，反应混合物中必须包含NP-40，以1:1的比例存在，以抵消SDS的抑制作用。对于非变性条件下的酶切，可能需要更多的酶和更长的孵育时间。在实验操作中，为了确保PNGaseF的好的活性，建议按照制造商提供的推荐缓冲液和条件进行实验。如果需要在不同的pH条件下使用PNGaseF，可能需要通过实验优化来确定好的条件。

NLS-Cas9Nuclease是一种重组的化脓性链球菌Cas9蛋白，它在N端和C端都添加了核定位信号（NLS），这使得它能够更有效地进入细胞核并进行基因组编辑。这种蛋白与CRISPR/Cas9系统的引导RNA（gRNA）形成稳定的核糖核的蛋白（RNP）复合物，可以在进入细胞后立即定位到细胞核，从而诱导特定的DNA双链断裂，实现基因编辑。与传统的mRNA或质粒系统相比，使用NLS-Cas9Nuclease不需要转录和翻译过程，因此可以避免将外源DNA插入基因组的风险，这对于基因编辑尤其有用。NLS-Cas9Nuclease的特点包括：1.无DNA：系统不添加外部DNA，降低了插入外源DNA的风险。2.高切割效率：双NLS确保Cas9蛋白高效进入细胞核。3.低脱靶效应：Cas9核酸酶的瞬时表达提高了切割的特异性。4.节省时间：无需转录和翻译过程。这种核酸酶可以用于体外DNA切割筛选高效和特异性靶向gRNA，以及通过电穿孔或注射与特定gRNA结合时的体内基因编辑。产品的保存条件通常是在-25~-15℃，有效期为一年。使用时，可以根据推荐的反应体系进行体外DNA裂解实验，并通过琼脂糖凝胶电泳检测消化效率。具体产品的详细信息和应用指南，可以参考金斯瑞生物科技有限公司、NEB、金斯瑞、YEASEN和Novoprotein等公司提供的资料。Probe qPCR Mix (2×)通常含有热启动DNA聚合酶，这种聚合酶在高温下激发，可以减少非特异性扩增 。

PreScissionProtease（PSP）是一种由人鼻病毒14型的3C蛋白酶（humanrhinovirus(HRV)type143Cprotease）和GST组成的融合蛋白。它具有以下特点：1.**特异性识别**：PreScissionProtease能在低温下（4°C）特异识别短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly氨基酸残基之间进行酶切。2.**依赖结构**：底物的识别和切割不仅依赖于融合蛋白的一级结构，还依赖于融合蛋白的二级和三级结构。3.**分离GST标签**：它可以特异性的将pGEX-6P系列等载体表达出的带有酶底物识别多肽序列融合蛋白的GST标签进行分离。4.**表达宿主**：本品由大肠杆菌中重组表达，并以无菌液体形式提供。5.**物理性质**：分子量约为46kDa，物理外观为无菌无色液体。6.**储存缓冲液**：25mMTris-HCl（pH8.0），150mMNaCl，1mMEDTA，5mMDTT，50%（V/V）Glycerin。7.**酶切缓冲液**：10×酶切缓冲液为500mMTris-HCl（pH7.0），1.5MNaCl，10mMEDTA，10mMDTT。8.**纯度**：经SDS-PAGE及HPLC分析，纯度大于95%。9.**酶活定义**：在5℃条件下反应16小时，能够切割10µg的GST标签的融合蛋白达90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。Taq DNA Polymerase 能够在相对较高的温度下保持稳定，其适催化温度在75-80°C。Recombinant Rat Coagulation Factor IIProtein,His Tag

Pfu DNA Polymerase 适合扩增较长的DNA片段，有助于在基因编辑中处理大的基因区域或复杂的基因结构。Recombinant Mouse FAM3D Protein,hFc Tag

在基因编辑中，除了NLS-Cas9-EGFPNuclease，还有多种技术可以提高编辑的特异性，这些技术包括：1.**高保真Cas9变体**：通过工程化改造Cas9蛋白，例如使用SpCas9-HF1或eSpCas9等高保真变体，可以减少脱靶效应，提高特异性。2.**碱基编辑器（BaseEditors）**：这类编辑器可以在不产生DNA双链断裂的情况下直接在特定位置进行单个碱基的转换，从而减少非目标编辑。3.**引导编辑器（PrimeEditors）**：由哈佛大学刘如谦教授团队开发的引导编辑器可以在不依赖DNA双链断裂和同源定向修复的情况下，实现精细的基因组编辑。4.**CRISPRi和CRISPRa**：这两种技术分别用于抑制或激起特定基因的表达，而不切割DNA，从而减少了脱靶风险。5.**新型CRISPR系统**：例如CRISPR/Cas12j和CRISPR/CasΦ，这些系统可能具有不同的PAM序列要求和更高的特异性。6.**AI辅助设计**：利用人工智能预测和优化sgRNA的设计，以减少脱靶效应。7.**优化递送系统**：改进CRISPR组分的递送方法，例如使用核糖核的蛋白（RNP）复合物，可以提高编辑效率和特异性。8.转座子编辑系统：利用转座子进行基因组编辑，可以在不依赖DNA双链断裂的情况下实现大片段DNA序列的插入。