关闭真空。同样,溶液将被吸收到印迹架中,并且表面可能看起来干燥。重要提示:孵育10分钟后,再抽真空。11.向下压框架并施加真空。等待5至8秒钟,直到框架完全空了。真空运行连续添加30 mL洗涤缓冲液(对于MultiBlot为15 mL)。重复洗涤步骤3次(共3次)4次洗涤)。12.关闭真空,然后从框架上取下吸墨架。从污点固定器中取出污点,并与适当的检测试剂。如果使用了MultiBlot孔空白,则卸下并清洗。 扩展一级抗体孵育:一小时至过夜1.执行《通用议定书》的步骤1至5。2.加入2.5 mL(对于MultiBlot),5 mL(对于Mini blot)或10 mL(对于Midi blot)1X一抗(浓缩液)通常在标准免疫检测过程中使用)。3.用盖子盖住吸墨纸固定架。如果需要的话,将其从底座上海益启生物的联系电话。青浦区Merck超滤杯Merck仪器联系电话
项卡(图8)创建和启动自定义协议。要手动控制流量,使用“手动模式”标签选择所需的井,压力,和温度(如果使用加热歧管)。有关自动化协议或每次融合的手册,请参阅CellASICO《ONIX2微流体系统用户指南》。注意:对于需要快速交换溶液的实验,请执行以下操作可以应用以下技术:高压(55.2kPa[8psi)下的流量对于初始过渡,然后将流量减小到标准压力长期暴露于6.9-13.8kPa(1-2psi)。 软件操作下图显示了使用ellAsICEONX2软件进行实验的两种模式,请参阅CllASICEONIX2MicrofuidieSystem用户有关软件功能的详细信息的指南。图7.手动模式降低了ONIX2系统的迭代操作。可以手动设置操作参数,此模式a5o提供了选项运行简短的自动印版设置序列,这些序列青浦区MerckWB实验加速器Merck仪器代理价格上海益启生物的细胞分析仪询价公司电话。
Heathybran,Alheimer'sbrain健康大脑。_Azheimers bran___健康大脑。Aheimer'brain。 Heathybrin。来自阿尔茨海默氏症患者的人脑样本和来自健康供体的细胞裂解细胞凹蛋白提取试剂(目录号71009)。样品是连续的稀释并通过SDS凝胶电泳分离。 s喱被转移到Immobilone-p膜上。印迹是使用MultiBlot在SNAP i.d.e 2.0系统中进行处理,迷你和Midi镜架及其相应的吸墨纸支架。通过标准免疫检测处理对照印迹所有印迹均用0.5%NFDM封闭并用一级抗Taul(目录号MAB3420)和二级HRP-共轭山羊抗小鼠(AP124P)在以下条件下如上所示。印迹与Luminata“ m Forte一起孵育将HRP基板放在X射线胶片上
utiBlot框架用于在MultiBlot框架中进行单点印迹时,放置正确处理一次印迹,然后空白卡在空井。未放入空白卡空井清洁不足确保框架**的所有系统垫片和阀门均处于院长,无碎屑或盐分。清空真空瓶,然后更换串联的Milx9-FA过滤器。可能由于以下原因堵塞了吸盘座:浓度在补充有缓冲剂的缓冲液中使用0.2-0.5%的干奶脱脂/低脂干0.1%Tweens 20表面活性剂,带有新的污点固定器。牛奶太高不兼容的封闭液使用新的吸盘固定器更换为强力封闭液。吸墨纸架的重复使用吸笔座只供一次性使用。请勿重复使用。低信号或低信号初级和/或次级将抗体浓度增加5到8倍。比标准抗体浓度过低免疫检测上下颠倒标记印迹的蛋白质一侧,并确保该污点检测试剂不敏感更换灵敏度更高的检测试剂,例如足够的Luminata用Forte细胞跨膜电阻仪的直销公司。
润湿印迹。,对于大多数应用和大多数抗体而言,0.5%的脱脂/低脂干奶溶液可以提供足够的膜的阻塞。注意:请勿使用浓度高于0. 5%的干奶,因为它可能会导致吸墨纸架堵塞膜。如果使用其他封闭溶液,请参阅表5了解兼容性和推荐浓度。●在洗涤,封闭和抗体缓冲液中始终使用0.1%Tween8 20表面活性剂。这将减少溶液的表面张力,并确保孵育过程中抗体在印迹支架中的均匀分布。●由于SNAP i.d. @ 2.0系统中的免疫检测时间很短,因此建议在开始操作之前应准备一抗和二抗稀释液。●MultiBlot固定器所需的稀释抗体的总体积为2.5 mL,Mini blot固定器为5 mL,10 mL用于Midi印迹固定器。,每次需要洗30次(MultiBlot为15毫升),以确保每次洗完后都能完全清洗印迹孵化步骤。益启生物公司带您了解WB实验加速器详情。青浦区MerckWB实验加速器Merck仪器代理价格
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