c ) 用无血清的冷培养基稀释ECM 胶至2 0 µ g/mL ，以5-10µg/cm2的密度加入到细胞小室的上层（按照ECM产品说明书的推荐比例和体积），轻轻摇晃使胶均匀铺在膜上。以上操 作在冰上进行。 d)立即将铺好ECM胶的细胞小室置于培养板中，于37°C孵育1小时，ECM胶可由液体凝成固体，吸走多余的或者未凝的胶。细胞用PBS清洗一次，EDTA或者0.05%胰酶消化，然后用包含5%BSA的无血清培养基中和，1500rpm离心5-10min。用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度至0.5-2.0x106cell/ml。益启生物是默克密理博细胞检测试剂盒的代理商。闵行区培养基细胞培养联系人
取上述200μL细胞液加入小室，下室（培养板）加入900L含有10% FBS的培养基。不同规格的小室和培养板所加的体积不同，具体参考Millicell®产品说明书。37°C孵育24至72小时，依据**细胞类型而定。孵育结束，小心取出细胞小室，吸掉小室上层培养液，PBS清洗一遍，70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min，0.5%结晶紫（2%乙醇或PBS溶解）染色20min，然后进行第8步或者第9步。PBS清洗两次以去除多余的染料，立即用棉签擦去滤膜上层的细胞，自然静置风干。显微镜下观察滤膜下层的细胞，随机选取不同的视野计数并算平均值。结晶紫溶解滤膜下层细胞，然后用33%醋酸脱色，将结晶紫完全洗脱下来，洗脱液可在酶标仪上570nm读取OD值。这种方法可以避免视野下细胞穿透不均匀带来的误差。宝山区添加剂细胞培养联系电话高质量的血清，保证您的实验结果。
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