试剂盒实验遇到复孔该怎么办。在设计复孔检查时，提出问题：是对同一个样品作两次稀释，再别离加到板上的两个孔，仍是只稀释一次，然后罗致两次别离加到两个孔？前者好像把稀释时的过错也考虑到了，但做出来的成果两个孔相关挺大的。在实验中设复孔，意图是为了削减本次实验的体系过错对实验数据带来的影响，所以应该用第二种，有条件的话复孔的数量能够添加，体系过错更小。选用后者。假定在实验室阶段，或许需求屡次稀释，然后将不同稀释次数的别离做复孔，以便检查稀释进程中带来的过错；假定同一次稀释的复孔一起的存在检测差异大，或许板的均一性存在必定问题（打扫操作因素）。假定不同稀释次数差异大，阐明稀释方法有问题。注意ELISA检测试剂盒保存期，过保存期的试剂不能使用。铬矾明胶包被液
氨苄青霉素溶液配置：组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素。配制量 50ml。配制方法：1．称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml/管）后，置于－20℃保存。氨苄青霉素为白色晶体或粉末，分子式是C16H19N3O4S,分子量为349.41。溶于稀酸和稀碱，微溶于水和甲醇，几乎不溶于氯仿、96%乙醇、、乙酸乙酯和固定油。无臭，味苦。抗革兰氏阳性及阴性菌，用于分子生物学和组织培养（防止微生物污染和抗性筛选）。EDTA—Na4P2O7溶液(0.1 mol/L 非无菌)科研实验中试剂取用应注意事项：取用一定量的液体—使用量筒。
如何正确保存和使用pH缓冲溶液：缓冲溶液配制后，应装在玻璃瓶或聚乙烯瓶中（碱性pH缓冲液，如，pH=9.18、pH=10.01、pH=12.46等，应装在聚乙烯瓶中）瓶盖严密盖紧，在冰箱中低温(5～10℃)保存，一般可使用六个月左右，如发现有混频器浊，发霉或沉淀现象，不能继续使用。使用时，应准备几个50mL的聚乙烯小瓶，将大瓶中的组冲溶液倒入小瓶中，并在环境温度下放置1～2个小时，等温度平衡后再使用。使用后不得再倒入大瓶中，以免污染，瓶中的缓冲溶液在＞10℃的环境条件下可以使用2～3天，一般pH=7.00、pH=6.86、pH=14.00三种溶液使用时间可以长一些，pH=9.18和pH=10.01溶液由于吸收空气中的二氧化碳，其pH值比较容易变化。
缓冲溶液的缓冲能力：在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱，其溶液pH值变化不大，但若加入酸，碱的量多时，缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1mol·L-1HAc和0.1mol· L-1NaAc组成的缓冲溶液，比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大，否则，不能忽视离子间的作用。组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时，缓冲作用减小，缓冲能力降低，当c（盐）/c（酸）为1∶1时△pH较小，缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算：此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远，缓冲能力愈小，甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系，存在有效缓冲范围，这个范围大致在pKaφ（或pKbφ）两侧各一个pH单位之内。丁胺卡那霉素给药说明：5%葡萄糖注射液或其他灭菌稀释液100—200ml。
主要试剂配制：（1）PBS：PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL，调pH7.2，高压灭菌，4℃保存备用。（2）RPIM-1640培养基：临用前根据需要加15%胎牛血清，较后按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。（3）台盼蓝染液：称取4g台盼蓝，于研钵中用少量双蒸水研磨，加双蒸水至100mL，1500rpm离心15min，吸取上层液，即为4%水溶液。用前，用1.8%氯化钠溶液稀释1倍，即为2%台盼蓝染液。固体试剂的取用:贴标签的一面必须朝向手心处【防止药液洒出腐蚀标签】。乙醇脱氢酶(ADH)提取试剂
检测试剂盒汲取液体时要选用量程和需求量接近的微量加样器吸，减少差错。铬矾明胶包被液
加药时间:由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。随着细胞的代谢G418的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。这时药物浓度可以降至200ug/ml。培养液:加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞。这时会出现两个问题：1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。这个时候需要一种特殊的培养液：假如你要转染3T3细胞，在3T3细胞汇合度达到80%的时候，换液，培养过夜之后收集培养液，通过滤器消毒，和新鲜的培养液按1：1混合备用。再转染后筛选过程中就可以应用这种培养基。铬矾明胶包被液
