温度敏感 温度对速度影响很小 温度对速度影响很小 温度较低时速度明显降低每一种蛋白的制备都是独特的,常常需要摸索和优化。应该考虑为特定蛋白选择相应的工具进行换液和透析。您可以从操作较快 Amicon® Pro 的渗滤法或更温和的 D-Tube™透析法中选择更适合样品的操作方法。这是一种只用一步温和的离心完成渗滤而较大程度保持蛋白活性的好方法。为了与下游应用兼容,常常需要用透析或渗滤方法对蛋白样品进行缓冲液置换。传统透析方法需要时间很长,多步透析容易造成样品丢失、损耗和失活,而且较后还需要一步浓缩。新产品 Amicon® Pro 带来了突破性的革新,只需一步温和的渗滤操作即可达到同时对样品进行换液和浓缩的目的。
较大化样品回收率
浓缩液中的样本回收量低可能由于吸附损失、过度浓缩、或者样本穿过滤膜造成。
吸附损失取决于溶质浓度、其疏水性、温度、与过滤装置表面的接触时间、样本成分及pH值。 为较大限度地降低损失,离心后请立即取走浓缩后样本。
如果样本起始浓度高,请监视离心过程,以免使样本过度浓缩。 过度浓缩可导致沉淀和样本损失。
如果样本看起来渗过了滤膜,请选用较低MWCO的Amicon® Ultra-15装置。
以***膜为重点技术,默克密理博为蛋白、核酸、病毒、囊泡等生物样品和微珠(纳米颗粒)的浓缩、脱盐、换液提供多样化操作工具。您可以方便地从以下产品中,根据起始样品体积和特别的要求,选择较适合处理方案。 广西超滤杯Millipore密理博规格上海Millipore过滤膜。
超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为较基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了广阔应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品明显小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”,操作时样品首先被浓缩,继而加入新的溶液,再次浓缩时,原溶液已经被换成选定的溶液。
蛋白质截留率和浓缩液回收率
Amicon®超过滤装置滤膜的特征由截留分子量(MWCO)描述,即它们截留超过一定分子量的分子的能力。分子量接近MWCO的溶质可能只有部分被截留。滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。在大多数应用中,分子量是用来评估截留特性的一个方便的参数。为了获得较佳结果,请使用MWCO至少比要浓缩的蛋白质溶质分子量小两倍的滤膜
如何量化回收
使用以下方法计算总回收量、浓缩液回收率%及滤出液回收率%。 本程序可算出浓度较高约20 mg/mL的溶液的回收量近似值。
说明: 适当的化验技术包括吸收分光光度学法、放射免疫检定法、折光率及传导性。
上海登宁Millipore一级代理。
外泌小体(Exosome)是一种囊泡结构,直径通常在30-150nm,常见于正常体液和病理样本,培养细胞也可分泌。研究人员已经在血液、唾液、尿液、母乳等中发现外泌小体,其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流,影响和调控着多方面的生理功能,包括免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现,外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利,成为体外诊断、biomarker研究的新热点。近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。Millipore密理博搅拌式超滤杯。吉林混合纤维素滤膜Millipore密理博品牌
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Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管,可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快,设计紧凑,螺旋盖使用起来非常方便,过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜,装有气密盖。优点与应用特有的反向流操作模式,较大的死体积,采用Ultracel®膜,用于浓缩和纯化富含颗粒物,的高浓度样品,样品回收率>90%,配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用,从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分,离低分子量溶质天津聚四氟乙烯滤膜Millipore密理博规格
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