Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）a
如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
c）离心机较近是否有校准过？
d）是否尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用更小截留分子量的超
滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。
2）a
如果目的样本也不在滤过液中，那么：
）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
Millipore密理博聚四氟乙烯滤膜。河南超滤离心管Millipore密理博
应用如果将压力罐与一个外部的压力源连接，压力罐中盛有 的液体便可通过 Merck Millipore 加压过滤器而得到过滤。 罐符合ASME-UM规范要求。密封盖用凸轮锁定手柄密封。 排气后可高温高压灭菌。附件压力释放阀、压力表和软 管接头符合法规规定。附件密封盖可保证压力罐在真空 环境下使用。应用用于真空过滤少量样品，进行颗粒或 生物污染物分析。提供熔结玻璃支撑 件或不锈钢支撑网。厚型预过滤膜或 带衬垫的滤膜不能密封在此过滤器 中。建议在溶剂过滤中使用 Durapore （PVDF）滤膜或不带衬垫的 PTFE 膜。警告 : 禁止与易燃性液体配合使用， 以免受伤。 装有滤膜的换膜过滤器不能高温高压 灭菌。吉林盒式超滤膜包Millipore密理博Millipore除菌过滤器。
通过超滤操作精确地将混在大分子中的小分子去除的想法常常不切实际。事实上，膜的规格描述是基于截留而非通过的性质。一项实验结果 显 示，采 用 100k NMWL 滤 膜，大 于 100kDa 的分子截留率>90%，但 这 时 比 膜 孔 径 小 的 分 子 并 不 是 完 全 自 由 地 通 过 滤 膜，75kDa 的分子截留率为 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的溶液中的各种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实践中，如果要分离两种大分子，它们之间的分子量差异应该达到 10倍以上，或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间，则可达到比较理想的分离。如果蛋白溶液较为稀释，低压下操作也有助于达到更好的效果
直接称重程序
大多数稀释蛋白的密度与水的密度大致相同 (即1 g/mL)。 利用这一特性，可通过称取浓缩液与滤过液重量并将其单位从克转化成毫升的方法，对其进行量化。 本方法适用于浓度不超过或约为20 mg/mL的溶液。
1. 使用之前，分别称取空的过滤装置、离心管和空的浓缩液收集管的重量。
2. 在过滤装置中加入溶液，然后重新称重。
3. 按说明组装装置和离心机。
4. 用移液管收集浓缩液，然后将其注入到已经预先称重的浓缩液收集管。
5. 从离心管上取下装置，然后称取离心管和浓缩液收集管的重量。
6. 减去空的装置/试管的重量，计算初始材料、滤过液及浓缩液的重量。
7. 化验初始材料、滤出液及浓缩液，以确定溶质浓度。
8. 使用重量/体积数据及所测出的浓度来计算回收量
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完整解决方案 化学相容性和溶出性 研究人员使用微滤膜去除各种水溶液和 有机溶剂中溶解的气体和颗粒。为了满 足其需要，默克密理博提供了具有广阔 化学相容性的膜。例如，Fluoro-pore ™疏 水性聚四氟乙烯膜可适用于过滤几乎所 有的有机溶剂，包括预湿后的强酸和碱 溶液。与其相比，Durapore® 聚偏氟乙烯 膜可更好地过滤水溶液，具有极低的蛋 白质吸附能力。 默克密理博的膜和过滤器由溶出度低的 聚合物制造，以确保您的过滤器在下游 能良好使用。 吸附作用 默克密理博的 Durapore（PVDF）和 Express （PES）膜经过表面改良，尽量减少吸附， 同时较大限度提高亲水性。用于溶出度 实验、食品和饮料的质量监控、土壤和 水质采样、过滤含有蛋白质添加剂的细 胞培养基。Millipore聚碳酸酯膜。山东小型膜包Millipore密理博材质
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蛋白质截留率和浓缩液回收率
Amicon®超过滤装置滤膜的特征由截留分子量（MWCO）描述，即它们截留超过一定分子量的分子的能力。分子量接近MWCO的溶质可能只有部分被截留。滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。在大多数应用中，分子量是用来评估截留特性的一个方便的参数。为了获得较佳结果，请使用MWCO至少比要浓缩的蛋白质溶质分子量小两倍的滤膜
如何量化回收
使用以下方法计算总回收量、浓缩液回收率%及滤出液回收率%。 本程序可算出浓度较高约20 mg/mL的溶液的回收量近似值。
说明： 适当的化验技术包括吸收分光光度学法、放射免疫检定法、折光率及传导性。
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