微滤中膜的孔径大小通常以微米计,表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据 NMWL 分级,有时也用截留分子量(MWCO)。NMWL 表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少 90% 以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见,实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时,孔径减小会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时,需要谨慎地选择合适的 NMWL 膜和设备。虽然影响因素较多,我们通常建议截留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以较大化样品的回收,同时节省过滤时间。上海登宁科技有限公司Millipore滤膜。广东过滤系统Millipore密理博规格
直接称重程序
大多数稀释蛋白的密度与水的密度大致相同 (即1 g/mL)。 利用这一特性,可通过称取浓缩液与滤过液重量并将其单位从克转化成毫升的方法,对其进行量化。 本方法适用于浓度不超过或约为20 mg/mL的溶液。
1. 使用之前,分别称取空的过滤装置、离心管和空的浓缩液收集管的重量。
2. 在过滤装置中加入溶液,然后重新称重。
3. 按说明组装装置和离心机。
4. 用移液管收集浓缩液,然后将其注入到已经预先称重的浓缩液收集管。
5. 从离心管上取下装置,然后称取离心管和浓缩液收集管的重量。
6. 减去空的装置/试管的重量,计算初始材料、滤过液及浓缩液的重量。
7. 化验初始材料、滤出液及浓缩液,以确定溶质浓度。
8. 使用重量/体积数据及所测出的浓度来计算回收量
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Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管,可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快,设计紧凑,螺旋盖使用起来非常方便,过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜,装有气密盖。优点与应用特有的反向流操作模式,较大的死体积,采用Ultracel®膜,用于浓缩和纯化富含颗粒物,的高浓度样品,样品回收率>90%,配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用,从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分,离低分子量溶质
应用真空过滤水溶液、有机溶液或腐蚀液 体,进行颗粒污染分析。同时建议 对 HPLC 溶 剂 进 行 过 滤。 请 与 Merck Millipore 联系了解过滤有机溶液时可 使用的滤膜。 与液体接触的硼硅酸盐玻璃部件,其表面用磨砂玻璃密封。整合的底座和 盖与真空的连接处在滤液出口的上 方,可避免滤液吸入真空管。 禁止该换膜过滤器与可燃液体一起使 用。
应用: 浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸(单株或双株DNA/RNA样本)、微生物、洗出液和净化样本的生物样本, 净化组织培养基提取液和细胞溶解液中的大分子成分,从反应混合液中去除引物、连接或分子标记,在HPLC之前去除蛋白质,除盐、更换缓冲液或渗滤
所提供的材料:Amicon® Ultra-15 10K装置包括一个盖子、一个过滤器和一个离心管。
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除盐、更换缓冲液或渗滤是去除含有生物分子的溶液中的盐分或溶剂的重要方法。 可以在Amicon® Ultra-15装置中,通过浓缩样本、然后向浓缩液加入任何所需溶剂复原至样本原始体积的方式,去除盐分或更换缓冲液。 可重复“洗出”过程,直到污染微溶质的浓度充分降低为止
流速
影响流速的因素包括样本的浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。图1和表1可用来估计达到给定的滤出液体积或浓度所需的时间。 15 mL样本旋转时间一般约需15至40分钟。 尽管大部分样本在离心过程的前15至30分钟滤过,但一般在旋转15至40分钟之后才能达到较低浓缩液体积(100–150 μL)。
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非无菌 Millex 过滤器现在采用一种更大的新 外壳,达 33 mm,装有默克密理博 Express PLUS (PES),Durapore (PVDF)和尼龙膜。 流速更快 更大的滤膜表面积提高了流速。它还降低了 排空注射器所需要的压力,从而使过滤溶液 更容易。 低保留体积 尽管膜表面积升高了,但是保留体积 ( 空气 吹过后 ) 被降低到 80 µL,比 25 mm Millex 过 滤器下降了 20%。 更高的操作压力 新型 33 mm Millex 非无菌包装过滤器较大外 壳压力为 8.6 bar(125 psi),这意味着你可 以比以前更快速的过滤溶液。 广东过滤系统Millipore密理博规格
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