基本原理:全自动核酸提取系统是一类应用配套的核酸提取试剂来自动化完成样本核酸快速提取过程的仪器。根据其提取方法的不同,可分为离心柱法核酸提取仪和磁珠法核酸提取仪。 离心柱法全自动核酸提取系统主要将离心机(负压装置)、自动移液装置和自动抓取器等功能组件集成于一体。其实现原理是:让核酸吸附到离心柱硅胶膜上,经过洗涤液去除杂质后,再从硅胶模上洗脱核酸。磁珠法核酸提取系统是将吸附在磁珠上的核酸,通过磁分离装置提取出来。根据分离装置的不同,可进一步分为移液式和磁棒式。移液式是通过自动移液装置完成加液裂解、样品混匀、洗涤洗脱、废液移除等步骤,吸附有核酸的磁珠被磁分离装置固定在样品管内,从而实现核酸分离。由于在移除液体时难免残留洗涤液,其中的盐和乙醇可能会影响后续洗脱效率和PCR反应体系。核酸是生物遗传信息的贮藏场所和传递者。武汉自动核酸提取销售厂家
核酸提取方法简介:磁珠吸附法将样本经裂解液消化后,释放出核酸,核酸与磁珠结合(特异性和非特异性),利用磁珠分离仪器将核酸提取纯化,作为后续扩增的模板。磁珠内核为氧化铁,一般应用于DNA、RNA纯化的磁珠为硅质膜磁珠,磁珠在高盐条件下与核酸结合,而在低盐环境中可被洗脱;或是磁珠上连有特殊设计的基团,用于对靶标核酸进行特异性的捕获,磁珠吸附法的主要优点是核酸提纯的特异性好,抗干扰能力强,容易实现全自动的核酸提取。磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂,操作简单,而且自动化操作保证了实验结果稳定,避免人工操作引起的差异及错误,并很容易达到核酸提取的标准化,符合核酸自动化提取要求,是核酸纯化方法发展的一个重要方向。南京全血核算提取设备厂家细胞或组织在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被释放出来。
磁珠法核酸提取的优势:磁珠法DNA提取是纳米科技与生物技术的完美结合,具有其它DNA提取方法不可比拟的优势:1.样本需求量低:微量的材料即可提到高浓度的核酸;2.操作简单快速:整个操作流程基本分为五步(裂解、结合、洗涤、干燥、洗脱),全程无需离心操作,大多可在30~60分钟内完成;3.质量稳定可靠:游离的磁珠与核酸的结合量更大,特异性的结合使得核酸纯度更高,且可通过控制磁珠表面基团来调节核酸回收量;4.全自动化操作:采用核酸提取仪可实现自动化、高通量操作,一键启动,即可实现几十甚至几百个样品的提取;5.安全无毒无害:试剂不含酚、氯仿等有毒化学试剂,完全符合现代化环保理念。
核酸提取类型:1.总RNA提取总RNA中,75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA),其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA(small nuclear RNA,snRNA)及核仁小分子RNA(small nuceolar RNA,snoRNA)等组成。提取MicroRNAs (miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子,如小干扰RNAs (siRNAs),通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达,以预防通过各种机制的表达。他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构3.基因组DNA提取进行基因结构和功能研究以及基因诊断,通常要求得到的片段长度不小于100~200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。核酸提取仪需要注意的事项:仪器接地:为了避免触电事故,仪器的输入电源线必须接地。
提取核酸需要使用pH 8.0的Tris水溶液饱和酚是为什么:苯酚是一种有机溶剂,具有强烈的变性蛋白质的作用,但它可以微溶于水,会残留在DNA所在的水相中,影响DNA的纯度。苯酚使用前需用Tris溶液进行饱和,以减少抽提DNA过程中吸收水分和损失DNA。 Tris溶液调节至pH 8.0,可以使DNA更加稳定地存在于水相中。此外,保存在4℃冰箱中的苯酚,容易被空气氧化变成粉红色,形成醌类物质而易使DNA降解,因此氧化的苯酚不能用于提取核酸,应使用pH 8.0的Tris水溶液再次饱和后使用,较好分装在棕色试剂瓶里,上面覆盖一层Tris水溶液或TE缓冲液,以隔绝空气。核酸提取仪需要注意的事项:远离带电电路。青岛自动核算提取设备批发厂家
用氧化锆珠纯化核酸是另一种类型的磁珠纯化方法。武汉自动核酸提取销售厂家
经典的核酸提取方法:经典的核酸提取方法是随着分子生物技术的发展而发展起来的。从质粒中提取核酸采用SDS碱裂解法:将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要OH-处理的强度和时间不要太过,当pH值恢复到中性时,DNA双链就会再次形成。在裂解过程中,细菌蛋白质破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物,后者被SDS包盖,当用钾离子取代纳离子时,这些复合物会从溶液中有效地沉淀下来。离心除去变性剂后,就可从上清中回收复性的质粒DNA。武汉自动核酸提取销售厂家