核酸:核苷酸单体聚合而成的生物大分子,是生物细胞好基本和好重要的成分。一般认为,生物进化即始于核酸,因为在所有生命物质中只有核酸能够自我复制。好近已知核酸是生物遗传信息的贮藏所和传递者。一种生物的蓝图就编码在其核酸分子中。核酸是1869年米歇尔()在脓液的白细胞中发现的。他当时称之为核素。阿尔特曼()于1889年认识其酸性后,定名为核酸。核酸的分类和功能:核酸分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两大类。这两类核酸有某些共同的结构特点,但生物功能不同。DNA贮存遗传信息,在细胞分裂过程中复制,使每个子细胞接受与母细胞结构和信息含量相同的DNA;RNA主要在蛋白质合成中起作用,负责将DNA的遗传信息转变成特定蛋白质的氨基酸序列。 磁珠法核酸提取过程中的常见误区:样本取用的越多,提取效果越好。广州全血核酸提取生产公司
核酸提取仪在日常操作中需要注意的几个事项:1. 进风口和排风口均位于仪器背面,同时避免灰尘或纤维在进风口聚集,保持风道的畅通。2. 远离带电电路:操作人员不得擅自拆解仪器,更换元件或进行机内调节必须有持证的专业维修人员完成,不要在接通电源的情况下更换元件。3. 仪器接地:为了避免触电事故,仪器的输入电源线必须接地。4. 核酸提取仪离其他竖直面至少10cm。5. 避免将仪器放置在靠近热源的地方,如电暖炉;同时为防止电子元件的短路,应避免水或者其他液体溅入其中。青岛核算提取试剂盒哪家好磁珠分离技术是一种简单高效的核酸提纯方法。
核酸的物理性质:①黏性:DNA的高轴比等性质使得其水溶液具有高黏性,很长的DNA分子又易于被机械力或超声波损伤,同时黏度下降。② 浮力密度:可根据DNA的密度对其进行纯化和分析。在高浓度分子质量的盐溶液(CsCl)中,DNA具有与溶液大致相同的密度,将溶液高速离心,则CsCl趋于沉降于底部,从而建立密度梯度,而DNA较终沉降于其浮力密度相应的位置,形成狭带,这种技术成为平衡密度梯度离心或等密度梯度离心。③稳定性:核酸的结构相当稳定,其主要原因有1、碱基对间的氢键2、碱基的堆积作用3、环境中的阳离子。
为了保证分离核酸的完整性和纯度,在实验过程中,应注意以下事项:1. 尽量简化操作步骤,缩短提取过程,以减少各种有害因素对核酸的破坏;2.减少化学因素对核酸的降解,为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏,操作多在pH4-10的条件下进行。3.防止核酸的生物降解,细胞内或外来的各种核酸酶消化核酸链中的磷酸二酯键,直接破坏核酸的一级结构,其中DNA酶,需要金属二价离子Mg2 、Ca2 的启动,使用EDTA、柠檬酸盐螯合金属二价离子,基本可以克制DNA酶活性。而RNA酶不但分布普遍,极易污染样品,而且耐高温、耐酸、耐碱、不易失活,所以是生物降解RNA提取过程的主要危害因素。磁珠法核酸提取纯化原理运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰。
玻璃粉或玻璃珠被证实为一种有效的核酸吸附剂。在高盐溶液中,核酸可被吸附至玻璃基质上,离液盐碘化钠或高氯酸钠可促进DNA 与玻璃基质的结合。Dederich 等用酸洗玻璃珠分离纯化核酸,获得高产量的质粒DNA。在该方法中,细胞在碱性环境下裂解,裂解液用醋酸钾缓冲液中和后,直接加至含异丙醇的玻璃珠滤板,被异丙醇沉淀的质粒DNA 结合至玻璃珠,用80 %乙醇真空抽洗除去细胞残片和蛋白质沉淀。较后用含RNase A 的TE 缓冲液洗脱与玻璃珠结合的DNA ,获得的DNA 可直接用于测序。磁珠法利用核酸自动提取仪进行核酸提取。济南自动核算提取设备批发厂家
核酸提取纯化原则和要求:排除其它分子的污染(如提取DNA时排除RNA的干扰)。广州全血核酸提取生产公司
核酸的提取核酸包括DNA、RNA两种分子,在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在,核酸提取的主要步骤为:裂解细胞去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子,去除其他不需要的核酸分子,如提取DNA分子时,应去除RNA,反之亦然。沉淀核酸纯化核酸,去除盐类,有机剂等杂质(一)DNA提取的经典方法DNA提取的经典方法,即所谓的酚-氯仿提取法。因为使用两种不同的有机溶剂交替抽提更容易将蛋白除去,提取次序为酚、酚/氯仿(1:1)、氯仿,这种方法提取的DNA纯度高、片段大、效果好,缺点是较为繁琐。 广州全血核酸提取生产公司