核酸提取类型:1.总RNA提取总RNA中,75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA),其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA(small nuclear RNA,snRNA)及核仁小分子RNA(small nuceolar RNA,snoRNA)等组成。提取MicroRNAs (miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子,如小干扰RNAs (siRNAs),通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达,以预防通过各种机制的表达。他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构3.基因组DNA提取进行基因结构和功能研究以及基因诊断,通常要求得到的片段长度不小于100~200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。注意事项:较好不要服用抗病毒的药物和,以免影响检测的结果。长沙自动核算提取试剂盒批发厂家
什么是核酸提取技术:核酸在生物体内通常与蛋白质结合存在,核酸提取就是根据核酸和其他细胞组分理化性质的差别,将核酸从细胞中分离并纯化出来的过程。1869年,瑞士医生 Friedrich Miescher首先从白细胞的细胞核中分离出一种称为“核素” 的化学物质。随后,研究者在提取材料和方法上不断进行改进,发展出一系列核酸提取技术。(1)传统的核酸提取方法:使用无机或有机化合物裂解细胞、释放核酸,在应用层析、萃取、硅胶膜吸附等方法沉淀核酸,传统的核酸提取方法操作步骤复杂、效率低,得到的核酸纯度不高,使用的有机溶剂也可能会对操作人员造成伤害。(2)自动化核酸提取:自从1980年一台临床研究自动化样本处理装置被投人使用以来,其快速、准确和重复可靠性强的工作能力较大提高了实验室工作效率,带来强大的高通量样本处理能力。同时也催生了实验室自动化的市场需求,带动了核酸提取技术的发展,国内实验室自动化系统研究相对来说起步较晚,但是经过多年的发展,国内自动化核酸提取领域已初具规模。核算提取试剂盒批发磁珠法利用核酸自动提取仪进行核酸提取。
电泳区分核酸大小:核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,琼脂糖凝胶电泳即根据这个原理对核酸进行区分。核酸分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在结构上具有重复性,长度相同的核酸链几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。此外,含有琼脂糖的凝胶具有网状结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在琼脂糖凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就较大提高了分辨能力。在同样电场的强度下,核酸分子的迁移速度取决于核酸分子本身的大小和构型以及琼脂糖凝胶的浓度,简而言之,分子量较大的核酸迁移速度较慢,分子量较小的核酸迁移速度较快,这就是应用凝胶电泳技术分离核酸片段的基本原理。
核酸的化学性质:①酸效应:在强酸和高温,核酸完全水解为碱基,核糖或脱氧核糖和磷酸。在浓度略稀的的无机酸中,较易水解的化学键被选择性的断裂,一般为连接嘌呤和核糖的糖苷键,从而产生脱嘌呤核酸。②碱效应1. DNA:当PH值超出生理范围(pH7~8)时,对DNA结构将产生更为微妙的影响。碱效应使碱基的互变异构态发生变化。这种变化影响到特定碱基间的氢键作用,结果导致DNA双链的解离,称为DNA的变性2.RNA:PH较高时,同样的变性发生在RNA的螺旋区域中,但通常被RNA的碱性水解所掩盖。这是因为RNA存在的2`-OH参与到对磷酸脂键中磷酸分子的分子内攻击,从而导致RNA的断裂。③化学变性:一些化学物质能够使DNA/RNA在中性PH下变性。由堆积的疏水剪辑形成的核酸二级结构在能量上的稳定性被削弱,则核酸变性。核酸提取仪严格控制孔间污染及批次间污染,杜绝交叉污染。
核酸检测注意事项:**提醒,在做核酸检测前2小时尽量避免进食,以免引起呕吐;采样**0分钟不应吸烟、喝酒、咀嚼口香糖等;检测者需要正确佩戴口罩,检测前取下口罩,检测后立即戴好,可准备一个备用口罩,污染后方便随时更换。在采集鼻咽拭子前检测者应告知采集人员是否鼻中隔弯曲及鼻腔手术史,过程中可能出现鼻部酸痒感,刺激打喷嚏,可立即用纸巾或手肘遮挡;鼻咽拭子采集后可能出现少量鼻腔出血,一般不需要特殊处理,如出血量较多请及时到医院进行处理。在采集口咽拭子时检测者头后仰,张口发出“啊”音,有助于暴露咽喉,但过程中会出现刺激性干咳、恶心、呕吐等症状,检测者可配合采集人员尽量放松、深呼吸;核酸检测前后都需要注意手部卫生,可使用免洗手消毒液或免洗酒精擦拭双手。核酸提取仪需要注意的事项:远离带电电路。深圳全血核酸提取哪家好
注意事项:在检测前也不宜饮酒,吃口香糖。长沙自动核算提取试剂盒批发厂家
核酸提取过程中,哪些因素会影响:1.固定剂对DNA的影响固定剂的类型直接影响提取DNA的质量.2.固定时间对DNA的影响固定过程中所发生的组织反应至今尚未被完全理解,虽然理论上讲室温下福尔马林与DNA几乎不发生的,但已发现碱基与组蛋白之间的甲基交联.3.固定温度等其他因素对DNA的影响核酸与固定剂的反应由反应成分、浓度、酸硷度以及温度等因素的调节,其中温度效应显得特别重要.4.组织处理过程对DNA的影响我们发现,从常规组织处理的蜡块中提取的DNA,其大部分分子量晨100bp-10000bp之间,主要分布于100-1500bp,光约1/3的组织所提取DNA>20kb。长沙自动核算提取试剂盒批发厂家