核酸提取仪配套试剂及其操作步骤:买了仪器后一定要考虑后续使用配套试剂的问题:1)配套试剂是否齐全。不同样本类型的提取试剂盒产品链是否完整2)配套试剂是不是预封装。非预封装的试剂需要实验员用移液器加入裂解液、洗涤液和洗脱液等试剂,并没有减少人工操作时间;3)提取前除了加样本外。是否需要添加蛋白酶K,由于有些公司并没有掌握裂解液中预封装蛋白酶K且常温储存的技术,蛋白酶K需要-20℃单独保存,需即用即加。每个样本多加一步蛋白酶K,96个样本多了10~15min左右的操作时间。4)配套试剂的保存温度。有些厂家的提取试剂需要在2—8℃运输保存,冷链运输增加运输成本,保存需要在冰箱中,而预封装提取试剂体积较大,在用量大特别像**这样大批量的使用,完全没有足够冰箱可以进行一段时间试剂的储存空间。5)提取后的扩增效率。提取核酸时观察磁珠残留率并且检测提取核酸质量!核酸提取纯化原则和要求:尽可能降低蛋白质、多糖和脂类等大分子物质。广州全血核算提取试剂盒生产公司
详解磁珠法核酸提取过程中的常见误区:某一种磁珠好,就应该在所有试验中效果都好:磁珠的种类是多种多样的,粒径大小不同,分散性不同,磁响应时间不同,包被基础基质不同,外层修饰官能团不同,包被密度不同,官能团臂长不同,会导致磁珠特性千差万别。所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。就像同样是核酸提取的试剂,配方也并不完全相同,同样应用于核酸提取的磁珠,性质也并非完全一致。有的磁珠在常量核酸提取中表现出了更高的吸附效率,有的磁珠更适用于微量核酸提取。有的磁珠适合偏酸性系列的试剂体系,有的磁珠适合偏碱性系列的试剂体系。有的磁珠磁响应性好但是沉降速度快,更适合磁棒式自动提取仪;有的磁珠沉降速度慢但是磁响应时间长,更适合移液式自动提取仪。深圳自动核算提取试剂盒批发温度过高或时间过长,也有可能导致核酸断裂或醇类挥发导致的提取效率下降。
核酸的分离与纯化:核酸的高电荷磷酸骨架使其比蛋白质、多糖、脂肪等其他生物大分子物质更具亲水性,根据它们理化性质的差异,用选择性沉淀、层析、密度梯度离心等方法可将核酸分离、纯化。(1) 酚提取/ 沉淀法:核酸分离的一个经典方法是酚∶氯仿抽提法。细胞裂解后离心分离含核酸的水相,加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25 ∶24 ∶1 体积) 混合液。依据应用目的,两相经漩涡振荡混匀(适用于分离小分子量核酸) 或简单颠倒混匀(适用于分离高分子量核酸) 后离心分离。疏水性的蛋白质被分配至有机相,核酸则被留于上层水相。酚是一种有机溶剂,预先要用STE 缓冲液饱和,因未饱和的酚会吸收水相而带走一部分核酸。
为了保证分离核酸的完整性和纯度,在实验过程中,应注意以下事项:减少物理因素对核酸的降解,物理降解因素主要是机械剪切力,其次是高温。机械剪切力包括强力高速的溶液振荡、搅拌,使溶液快速地通过狭长的孔道,细胞突然置于低渗液中,细胞炸开式破裂以及DNA样本的反复冻贮。这些操作细节在实验操作中应倍加注意。机械剪切作用的主要危害对象是大分子量的线性 DNA分子,如真核细胞的染色体DNA。对分子量小的环状DNA分子,如质粒DNA及RNA分子,威胁相对小些。高温如长时间煮沸,除水沸腾带来的剪切力外,高温本身对核酸分子中的有些化学键也有破坏作用。核酸提取过程中,一般在低温操作,但现在发现在室温快速提取与低温提取,获得核酸的质量没有太大差异。注意事项:在检测前也不宜饮酒,吃口香糖。
核酸的物理性质:①黏性:DNA的高轴比等性质使得其水溶液具有高黏性,很长的DNA分子又易于被机械力或超声波损伤,同时黏度下降。② 浮力密度:可根据DNA的密度对其进行纯化和分析。在高浓度分子质量的盐溶液(CsCl)中,DNA具有与溶液大致相同的密度,将溶液高速离心,则CsCl趋于沉降于底部,从而建立密度梯度,而DNA较终沉降于其浮力密度相应的位置,形成狭带,这种技术成为平衡密度梯度离心或等密度梯度离心。③稳定性:核酸的结构相当稳定,其主要原因有1、碱基对间的氢键2、碱基的堆积作用3、环境中的阳离子。磁珠法利用核酸自动提取仪进行核酸提取。深圳自动核算提取试剂盒批发
高活性的表面活性基团与核酸分子特异性识别和高效结合。广州全血核算提取试剂盒生产公司
磁棒法核酸提取仪:通量通常有8、16、32、96通道,相对于抽吸法,磁棒法的优点是每一步的液体不残留,因为磁棒只带走磁珠,转移到下一个步骤相应的反应孔中,另外选择磁棒法的提取仪器较好要功能更齐全的,比如可以加热,每个加热槽较好单独温控,这样可以设置加热、裂解、洗脱的不同温度,另外很重要的一点是,带动磁棒的电机要能带动磁棒进行液体的快速混匀和搅拌,这样才有利于自动化和有助于裂解和漂洗彻底。磁棒法的通量选择较好是32通道,96通道的看似通量更高,但是有个很现实的问题,96个磁力棒在从一个板转移至另外一个板的时候,磁力棒上面的液体中途滴下来怎么办,它会滴到别的孔中造成污染,而32通道的磁力棒运行轨迹不经过其他样本的上空,这样不会交叉污染。广州全血核算提取试剂盒生产公司