磁珠法核酸提取的不同点:磁珠法核酸提取由裂解、结合、洗涤、洗脱等步骤组成,不同厂家生产的磁珠法核酸提取试剂有所不同,主要体现在:(1)磁珠大小不同;(2)磁珠修饰方式不同;(3)洗涤方式不同;(4)样本量不同。磁珠粒径小,比表面积大,核酸捕获能力强,可带磁珠上机检测,提高检测灵敏度。粒径大小不一样,对于不同大小的核酸片段有不同的喜好性,一般来说粒径较大的磁珠,磁响应性比较大,捕获小片段核酸的能力大一点。粒径较小的磁珠,磁响应性比较小,捕获大片段核酸能力大一点。不同粒径磁珠,比表面积不同,捕获核酸能力不同。与此同时,粒径较大的磁珠,比表面积较小,捕获核酸能力稍差;粒径较小的磁珠,比表面积较大,捕获核酸能力稍强。样本裂解是核酸提取过程中很关键的一步。深圳自动核算提取试剂盒供应商
提取方法:1.表面活性剂快速制备法使用TritonX-100A或NP40表面活性剂对细胞破碎,然后使用蛋白酶K或酚将蛋白去除,使用乙醇沉淀或透析。2.加热法快速制备温度96℃-100℃加热5min,之后离心后取上清,能够在PCR反应时使用。3.碱变性快速制备首先使用NaOH作用20min,再将HCI加入中和,离心后取上清,含有少量DNA。4.玻璃棒缠绕法使用盐酸胍对细胞进行裂解,在乙醇上铺上裂解物,然后在界面使用带钩或U型玻璃棒轻搅,在玻棒绕DNA沉淀液,使得80kbDNA生成。 广州自动核算提取试剂盒公司注意事项:严禁用手或其他物品触及拭子采样冠、棉签的前端,以免造成污染,影像检测结果。
详解磁珠法核酸提取过程中的常见误区:样本取用的越多,提取效果越好:在样本不够新鲜或者核酸含量本身就很少的情况下,往往核酸提取效果不好,很多老师就会采用多取样本的方式增加核酸提取量。但简单地增加样本取样量,有时会引入过多的杂质,超出裂解液裂解能力,也会使提取效率降低,所以并不推荐通过简单的增加样本取样量的方式来达到增加提取量的目的。如果确实是由于样本量不足而引起的提取量过低,建议在前处理先经过富集或者浓缩步骤再开始提取。或者增加裂解的完全性,使更多的核酸暴露出来也是一种解决方法。
根据提取原理不同划分:①采用离心柱法的仪器离心柱法核酸提取仪主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法,通量一般在1-12个样本,操作时间和手工提取差不多,并不能提高实际工作效率,且价格昂贵,不同型号仪器的耗材也不能通用,*适合经费充足的大型实验室使用。② 采用磁珠法的仪器以磁珠为载体,利用磁珠在高盐低PH值下吸附核酸,在低盐高PH值下与核酸分离的原理,再通过移动磁珠或转移液体来实现核酸的整个提取纯化过程。由于其原理的独特性,所以可设计成很多种通量,既可以单管提取,较大提高了实验效率,且成本低廉,因而可以在不同实验室使用,是目前市场上的主流仪器。搭配不同种类的磁珠核酸试剂组,可以快速提取动植物组织、血液、体液、刑事检体等样品中的DNA和RNA。核酸提取在水相中主要溶解以DNA为主的核酸成分。
核酸提取纯化方法:1.酚/氯仿抽提法1956年发明,通过酚/氯仿处理细胞破碎液或者组织匀浆后,在水相中主要溶解以DNA为主的核酸成分,在有机相中主要是脂类物质,蛋白质位于两相之间。2.醇沉淀法乙醇能够消除核酸的水化层,使带负电荷的磷酸基团暴露出来,NA﹢等带正电荷离子能与磷酸基团结合,形成沉淀。3.层析柱法通过特殊硅基质吸附材料,能够特定吸附DNA,而RNA和蛋白质顺利通过,然后利用高盐低PH结合核酸,低盐高PH值洗脱,来分离纯化核酸。核酸提取仪需要注意的事项:不要在接通电源的情况下更换元件。长沙核酸提取公司
核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。深圳自动核算提取试剂盒供应商
什么是核酸:由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的好基本物质之一。核酸较广存在于所有动植物细胞、微生物内、生物体内的核酸常与蛋白质结合形成白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。提取核酸的方法及其优缺点:1.保证核酸一级结构的完整性。2.排除其它分子的污染。核酸提取应注意的问题:1.简化步骤,缩短提取时间2.减少化学因素对核酸的降解3.减少物理因素对核酸的降解:机械剪切力和高温4.防止核酸的生物降解。 深圳自动核算提取试剂盒供应商