荧光基团:FITC:FITC是大面积使用的荧光基团,但其比较大的缺点是淬灭快,使用抗淬灭剂可以减轻。AMCA:常用在多标记实验中,如免疫荧光、流式细胞术。其缺点是,淬灭快,且由于肉眼不能很好的检测其所激发的蓝色荧光,因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。花青染料(Cy2,Cy3,Cy5):Cy2比FITC更稳定,且在表面荧光显微镜下,Cy2的荧光FITC更强。Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮,更稳定,背景更弱。二者常在共聚焦显微实验中作多标记。但Cy5的缺点是不能用表面荧光显微镜观察,因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜观察。TRITC,RRX,TR:TRITC经常和FITC一起用于双标记实验中,也可以使用RRX或TR,但TR会产生较高的背景。在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时,RRX尤其有用,可以和Cy2(或FITC)及Cy5一起使用,因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间,且和这两者的重叠很少。PE:常和FITC一起用于流式细胞术双标记实验。生物素:生物素(biotin)可以和***蛋白(avidin)发生不可逆反应而紧密结合在一起。首先加入生物素标记的二抗;在加入耦联有酶或荧光集团的avidin、ExtrAvidin或streptavidin,后者能够结合于二抗表面的多个位点上。 抗体按理化性质和生物学功能,可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。河北proteintech抗体哪里有
抗体功能区介绍:构成抗体单体分子的四条多肽链中,每条肽链又可被链内二硫键连接形成几个球形结构,并具有不同生物学功能,这些具有生物学功能的球型结构称为抗体的功能区。每条轻链有两个功能区(VL和CL)。IgG、lgD的H链有四个功能区(即VH、CH1、CH2、CH3);IgM和IgE重链有五个CH,即多一个功能区CH4。抗体同时有两个功能,抗体能中和病原体通过结合到其抗原,并阻止他们的行动,如防止病毒进入细胞,或阻断细菌***,抗体还可以调理破坏病原体,该过程通过标记病原体,使免疫系统的其他细胞可以识别。 浙江山羊抗体二抗小分子抗体可原核表达,制备简单,成本低。其分子质量小,易于穿透组织屏障,进入病灶部位。
抗体规律:
(1)初次反应产生抗体:当抗原***次进入机体时,需经一定的潜伏期才能产生抗体,且抗体产生的量也不多,在体内维持的时间也较短。
(2)再次反应产生抗体:当相同抗原第二次进入机体后,开始时,由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合,可使原有抗体量略为降低。随后,抗体效价迅速大量增加,可比初次反应产生的多几倍到几十倍,在体内留存的时间亦较长。
(3)回忆反应产生抗体:由抗原刺激机体产生的抗体,经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原,可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同,则称为特异性回忆反应;若与初次反应不同,则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的,短时间内即很快下降。
一抗宿主物种的选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,比较好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG的细胞裂解物样本的westernblotting检测,尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在westernblot检测中则结合出现IgG分子50and25kDa的重链和轻链条带。 一抗是在什么物种来源的,相应的二抗也要是抗该物种的抗体。
生物活性:
(1)结合特异性抗原:抗体与其他免疫球蛋白分子区别,就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合,在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。
(2)***补体:抗体与相应抗原结合后,借助暴露的补体结合点去***补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。
(3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,产生不同的疚,参与免疫应答。
(4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗***免疫的主要因素。
(5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化。 按与抗原结合后是否出现可见反应分为:在介质参与下可见结合的完全抗体;浙江山羊抗体二抗
***抗体就是能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。河北proteintech抗体哪里有
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