CoIP-Mass和CoIP-WB检测要点：
抗体关键质控：抗体特异性和亲和效价要求高，尽量采用标签抗体或经过CoIP效果验证的抗体。抗体质量参差不齐（WB能检测到预期条带不到1/2，能检测到良好结果的不到1/4）和存在非特异性结合（几乎所有的抗体都存在非特异结合，部分非特异结合条带远大于目的条带），CoIP-MS需做WB和CoIP-WB质控。初次和检测CoIP都需要做WB质控。正式CoIP可同时增加考染/银染质控。抗体可参考数据库（ValidatedAntibodyDB,)。 免疫共沉淀实验步骤主要包括几个部分。四川免疫沉淀CoIP联合质谱
免疫共沉淀也存在一些局限性。例如，它可能无法检测到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用。此外，两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用。此外，实验前需要预测目的蛋白以选择相应的抗体，因此，如果预测不正确，实验可能无法得到结果，这使得这种方法具有一定的冒险性。总的来说，免疫共沉淀是一种强大的技术，它能够为我们提供关于蛋白质相互作用的宝贵信息。然而，为了得到准确和可靠的结果，我们需要谨慎地解释和分析实验数据，并考虑到这种方法的局限性。四川免疫沉淀CoIP联合质谱Co-IP技术可靠，但需注意潜在限制与影响因素，综合验证确保准确性！
COIP技术优点如下：
相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；
蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；
可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
然而该技术也存在缺点，具体如下：
可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；
两蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；
须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择后面检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。
免疫共沉淀实验步骤主要包括以下五个部分：样品处理：将细胞或组织样品进行裂解，得到待检测的蛋白质混合物，并加入蛋白酶抑制剂以避免目标蛋白被降解。抗体处理：将专一的抗体连接到亲和树脂上，如蛋白A的亲和树脂或蛋白G的亲和树脂，或将蛋白与其特异性抗体结合，新形成的复合物与封闭剂缓慢摇摆在二氧化硅珠上，使碘酸钙交联后节制反应。免疫共沉淀：将有抗体树脂的样品与吸附抗体树脂形成免疫复合物。洗涤：采用洗涤缓冲液对样品进行洗涤，以去除非特异性的蛋白质和杂质，同时尽量避免对复合物的影响。洗涤缓冲液选择对样品不会引起较大影响的缓冲液和洗涤剂。蛋白鉴定：将沉淀的复合物通过SDS-PAGE分离出来，并进行Western blotting检测目标蛋白及其配偶蛋白。另一方面，也可以直接使用质谱分析检测。IP-WB技术结合免疫沉淀与Western Blot，高特异、高灵敏验证蛋白互作，支持功能研究与药物开发！
Co-IP（免疫共沉淀）实验注意事项主要包括。抗体选择：选择特异性强的抗体至关重要，以确保与目标蛋白的准确结合，减少非特异性干扰。样品准备：样品的纯度和质量对实验结果有重要影响，因此要确保样品的制备过程规范，避免杂质干扰。实验条件：在操作过程中，要注意合适的实验条件，如温度、pH值等，以保证实验的顺利进行和结果的稳定性。洗涤步骤：洗涤步骤是去除非特异性结合的关键，要确保洗涤充分，去除杂质，同时避免目标蛋白的丢失。抗体浓度：抗体浓度也是影响实验结果的重要因素，要根据实验需要选择合适的抗体浓度。阴性对照：设置阴性对照对于判断结果的可靠性至关重要，要确保阴性对照无明显结合。遵循以上注意事项，可以提高Co-IP实验的准确性和可靠性，为后续研究提供有力支持。Co-IP外源检测需注意蛋白互作真实性、表达系统与标签选择、规范操作及结果验证，确保准确性！四川免疫沉淀CoIP联合质谱
IP-Mass实验流程：样品制备、免疫沉淀、洗脱、蛋白酶消化、质谱分析、数据分析，鉴定互作蛋白！四川免疫沉淀CoIP联合质谱
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种在生物药物领域广泛应用的技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。该技术通过利用特异性抗体将目标蛋白与其相互作用的蛋白一同沉淀下来，从而揭示蛋白质间的相互作用关系。在蛋白泛素化研究方面，Co-IP技术也发挥着重要作用。通过该技术，研究人员可以鉴定并验证与泛素连接酶和泛素受体相互作用的蛋白质，进一步揭示泛素化修饰的调控机制。同时，结合质谱分析，Co-IP技术还可以鉴定泛素化修饰的靶标蛋白质及其相互作用蛋白质，揭示泛素化修饰在细胞信号传导、代谢调控等生命过程中的功能和调控网络。四川免疫沉淀CoIP联合质谱
