TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记）染色是一种常用的分子生物学技术，用于检测细胞凋亡过程中DNA的断裂。这种染色方法可以特异性地标记DNA片段化的末端，从而识别出正在经历凋亡的细胞。TUNEL染色的基本原理在细胞凋亡过程中，DNA会受到内切酶的切割，形成大量的双链断裂和单链断裂。TUNEL染色利用末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）将标记的dUTP（通常是荧光素或生物素标记的dUTP）添加到这些断裂的DNA末端。通过这种方法，可以直观地观察到发生DNA断裂的细胞，进而判断细胞是否处于凋亡状态。CD34染色用于标记血管内皮细胞。茜素红染色原理
TUNEL染色的染色步骤1. 样品准备：•将组织切片或细胞固定在载玻片上，通常使用4%多聚甲醛或其他固定剂。•进行蛋白酶K处理，以增加细胞膜的通透性，使TdT能够进入细胞并接触DNA。2. TUNEL反应：•准备TUNEL反应混合液，包括TdT酶和标记的dUTP（如荧光素或生物素标记的dUTP）。•将反应混合液滴加到样品上，在适当的温度下孵育一定时间（通常为1小时左右）。3. 洗涤：•用PBS缓冲液或其他适当的洗涤液清洗样品，去除未结合的dUTP。4. 信号检测：•如果使用的是荧光素标记的dUTP，可以直接在荧光显微镜下观察。•如果使用的是生物素标记的dUTP，则需要进一步与链霉亲和素-荧光素复合物或其他显色试剂结合，然后在显微镜下观察。南京抗酒石酸酸性磷酸酶染色外包染色切片在教学中用于展示组织学特征。
常见染色方法有：苏木精-伊红染色（H&E染色）•用途：是**常用的组织学染色方法，适用于几乎所有类型的组织。•结果：细胞核被苏木精染成蓝色或紫色，细胞质被伊红染成粉红色。Masson三色染色•用途：用于显示胶原纤维、肌纤维和细胞核。•结果：胶原纤维呈蓝色，肌纤维呈红色，细胞核呈蓝黑色。天狼星红染色•用途：用于显示胶原纤维，在偏振光下区分不同类型的胶原纤维。•结果：I型胶原纤维呈亮黄色或橙红色，III型胶原纤维呈绿色或黄色。PAS染色（过碘酸雪夫染色）•用途：用于检测糖原和其他多糖物质。•结果：糖原和其他多糖物质呈紫红色或粉红色。银染技术•用途：用于显示神经纤维、网状纤维等。•结果：神经纤维和网状纤维呈黑色或深棕色。免疫组化染色•用途：用于检测和定位特定的蛋白质或抗原。•结果：特定的蛋白质或抗原被标记并显现出特定的颜色。
病理染色可用于研究疾病机制•病理过程：病理染色可以帮助研究人员了解疾病的发病机制和发展过程。例如，通过连续的切片染色，可以观察到疾病的进展和变化。•分子标记：免疫组化染色等特殊染色方法可以用于检测特定的蛋白质或其他生物分子，揭示其在疾病过程中的作用。4. 评估药物疗效和毒性•药物效果：在药物研发过程中，病理染色可以用来评估药物对组织的影响，包括药物的***效果和潜在的副作用。•毒性研究：通过染色，可以观察到药物引起的组织损伤或毒性反应，帮助确定药物的安全性。5. 比较研究•对照组与实验组：在动物实验中，通常会设置对照组和实验组。通过病理染色，可以比较不同组之间的组织结构和细胞状态，从而验证实验假设。•不同条件下的差异：可以比较不同实验条件（如不同剂量、不同时间点）下的组织变化，了解各种因素对组织的影响。天狼星红染色在偏振光下可以区分不同类型的胶原纤维。
对于荧光染色切片往往需要用到冰冻包埋及切片基本原理：•快速冷却：将新鲜的组织样本迅速冷却到低温（通常为-20°C至-30°C），使其变得坚硬。•切片：使用冷冻切片机将冷冻的组织切成薄片。由于组织没有经过固定的步骤，因此可以较好地保存细胞膜表面和细胞内的多种酶活性以及抗原免疫活性。优势：•快速：制作过程比石蜡切片更快捷，通常只需几分钟到几十分钟。•简便：不需要复杂的脱水、透明化和浸蜡步骤。•活性保留：能够较好地保存细胞内的酶活性和抗原免疫活性，适用于需要检测这些活性的研究。阿尔辛蓝染色用于检测酸性黏多糖。南京天狼星红染色
Periodic Acid-Schiff (PAS)染色用于检测糖类物质。茜素红染色原理
病理染色切片所用到的主要设备•生物组织包埋机 (YD-6L)：用于将处理好的组织样本包埋在石蜡中，以便于后续的切片操作。•石蜡切片机 (Leica HistoCore MULTICUT)：高质量的切片机，能够精确地将石蜡包埋的组织切成薄片。•正置荧光显微镜带100倍油镜 (Leica DM4000B)：具备高分辨率和荧光成像功能，适用于多种显微镜观察需求。•尼康图像采集显微镜：用于捕捉和记录显微镜下的图像，便于数据保存和分析。•摊片机：用于将切片平整地放置在载玻片上，确保切片的质量和一致性。•通风橱：用于处理挥发性或有害化学品，确保实验室的安全和卫生。总之，病理染色实验室是一个多功能的设施，能够完成从样本处理到染色再到观察的全过程。配备先进的设备和技术，该实验室不仅支持常规的病理学实验，还可以进行复杂的免疫组化和特殊染色实验，为疾病诊断和科学研究提供了强有力的支持。茜素红染色原理
