河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

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PNGaseF去糖基化酶基本参数

品牌
Genovis
型号
L1-F02-025

PNGaseF去糖基化酶企业商机

为了证明Genovis的PNGase F冻干和PNGase F固定在各种底物上的去糖基化能力，用PNGase F冻干或PNGase F固定化处理了一系列糖蛋白。使用天然反应条件在一小时内有效去除曲妥珠单抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔单抗上的Fc-糖。当加入RapiGest™并在变性条件下进行反应时，西妥昔单抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分钟内完全去除，PNGase F固定化15分钟内完全去除。在变性反应条件下，PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用变性和还原反应条件，将常用的糖蛋白标准品RNase B在10或15分钟内完全去糖基化，分别使用PNGase F冻干或PNGase F固定化。在天然和变性条件下生成的去糖基化样品与LC-MS分析兼容。SialEXO冻干由两种唾液酸酶组成，每种唾液酸酶都具有独特的活性，并且它们同时起作用。河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

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与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖：糖基化往往是异质的，这使得对高度糖基化的生物zhiliao药物的分析具有挑战性。完整质量数的确认以及其他产品质量属性的表征受到不同糖型复杂性的阻碍，这就是为什么有效的聚糖去除工具简化了此类分析的原因。虽然 N-聚糖包含一个共同的结构，并且可以通过 PNGase F 整体去除，但粘蛋白型 O-聚糖在结构上更加多样化，具有多个不同的he心。OmniGLYZOR含有固定化酶的混合物，能够依次分解O-聚糖，以完全去除最常见的O-聚糖结构（二唾液酸和单唾液酸基he心1和Tn抗原）。浙江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究IgA 特异性O-糖肽富集：胰蛋白酶消化IgA。

SialEXO 2-3 在天然条件下水解糖蛋白，在 pH 值范围为 7.0 至 9.0 时显示出活性。该酶来源于Akkermansia muciniphila，并在大肠杆菌中表达。该酶具有 His 标签，分子量为 66 kDa。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高用于离心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的SialEXO酶，用于糖蛋白的去唾液酸化，而不会被酶污染z终制剂。它水解天然糖蛋白上的唾液酸（α2-3、α2-6 和 α2-8）并释放出聚糖。效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。

与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR用于携带N-和简单O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 试剂盒包括：OmniGlyZOR 微离心柱；PNGase F 冻干；RapiGest™* SF表面活性剂。除非底物蛋白变性，否则某些 N-糖基化位点很难或无法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在变性条件下使用试剂盒中包含的PNGase F冻干和RapiGest™ SF表面活性剂通过额外的去糖基化步骤去除。使用Genovis的OpeRAT对EPO进行O-糖位点特异性消化：对于jin携带一个或几个 O-糖基化位点的简单底物蛋白，OpeRATOR 也可用于绘制中间水平的 O-糖基化位点。 SialEXO是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶；

使用Genovis的OpeRATOR图谱O-聚糖位点对依那西普进行LC-MS分析：依那西普是一种 Fc 融合蛋白，具有高度 O-糖基化的铰链区域。将依那西普与OpeRAT一起孵育，并使用LC-MS/MS分析所得糖肽。促红xibao生成素（EPO）是一种具有单个 O-糖基化位点的 ~30 kDa 糖蛋白。在PNGase F去除N-糖并使用SialEXO进行去唾液酸化后，用OpeRAT消化天然蛋白，并通过反相LC-MS分析所得蛋白质片段。O-糖基化的位点可以通过识别OeRATOR消化位点直接推断出来。为了获得良好性能，需要去除唾液酸助剂，因此购买中包括2000个单位（如果SialEXO冻干）。1. 用于方法开发的灵活产品形式；2. 可以结合酶以提高效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。O-聚糖是OpeRATOR活性所必需的，而该酶在N-聚糖上没有活性。OpeRATOR和SialEXO处理后，O-糖基化蛋白被消化成携带O-聚糖的肽。消化发生在O-糖基化位点的N端。FucosEXO 在1小时内对所有三种 TNFR 蛋白去岩藻糖磺酸处理。河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

使用 GalNAcEXO 对 O-糖基化生物制药进行 Tn 抗原表征。河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素（EPO）是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质，其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置，因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

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