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    了解硅胶基质填料:1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团(ZH2,APS)和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性教强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强落的组份**先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯（Chloroform）二氯甲烷（MethylenceChloride）等.2、反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对教弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性教强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性教强组合**先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18（ODS）C8（MOS）。C4（B）C6H5（Phenyl）等。2聚合物填料：聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸至等，其主要优点是在PG值为1-14均可使用。相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的淑水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效教低。3其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。上海高信化玻提供德国默克试剂。德国Merck默克代理商

    新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。每次工作完后，比较好用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素（氟、氯、溴）的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。色谱柱展望编辑1、石墨化碳填料硅胶的化学稳定性较差，*能在pH=2~8的环境下工作。但是，在很多场合下，需要使用极端的pH条件。为此，人们曾大力发展高分子微球、氧化铝、氧化锆等化学稳定性更好的基质材料。但是，很难有一种材料能***地满足液相色谱基质的要求。例如，高分子微球在有机溶剂中会发生一些溶胀，因此难以应用于以含有机溶剂的流动相进行梯度淋洗的场合；氧化铝和氧化锆与硅胶相比，虽然化学稳定性较好，但其表面修饰与键合比较困难。因此，化学稳定性好的碳材料便很自然地被考虑作为色谱填料的基质。碳材料有极好的化学稳定性，可耐受宽达pH=1~14的环境；耐高温，石墨化碳可耐3000℃以上的高温而不受破坏；经适当加工的碳材料可具有很好的机械强度。湖北专业默克甲醇色谱柱有直管形、盘管形、U形管等形状。

由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用，是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故。当向这种溶液中加入一定量的强酸时，H+离子基本上被A-离子消耗：所以溶液的pH值几乎不变；当加入一定量强碱时，溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱，其溶液pH值变化不大，但若加入酸，碱的量多时，缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1mol·L-1HAc和0.1mol· L-1NaAc组成的缓冲溶液，比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大，否则，不能忽视离子间的作用。

  Merck的HPLC乙腈pH=，分析纯的乙腈pH=。但记忆中pH应该是氢离子浓度的负对数，纯的有机溶剂哪来的氢离子？pH又**什么呢？说到受骗可能只能怪自己，这是对我自己说的，因我也有受骗上当的事。1.一直以为分析纯和色谱纯试剂的区别在于前者的纯度高点，杂质少点，**主要的是前者中有的紫外吸收杂质更少，可不想不是这么回事。我们用苯肼显色后HPLC测甲醛的含量，以前一直正常，可**近不知为什么出现了一个很明显的空白值，排除了可以想到的所有的可能性还是一无所获，很是郁闷，昨天有个同事突发奇想，说会不会是分析纯乙腈带进去的，因为我们为了节约色谱纯试剂的使用，用分析纯乙腈对样品进行定容想进样量只有微升级，应该不会有影响，好多实验都是这么做也没发现有异常，但这次是死马当活马医了，就试了一下，居然就是该死的分析纯乙腈带进去的，当时我差点晕过去。2.也是觉得分析纯和色谱纯试剂的区别在于前者纯度高点，但发现分析纯的甲醇与水1：1混合时是混的，而色谱纯的是清的。上海高信化玻提供德国默克色谱柱。

    并放在稳定的环境中存放。2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落，避免造成色谱柱性能的降低。色谱柱色谱柱的再生用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子，建议按柱子的箭头方向冲洗，尽可能不反冲。冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇。色谱柱性能评价编辑色谱柱的性能除了与固定相性能有关外，还与填充技术有关。在正常条件下，填料粒度>20μm时，干法填充制备柱较为合适；颗粒<20μm时，湿法填充较为理想。填充方法一般有4种：①高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充；②径向加压法，Waters**；③轴向加压法，主要用于装填大直径柱；④干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。必须指出，高效液相色谱柱的获得，装填技术是重要环节，但根本问题还在于填料本身性能的优劣，以及配套的色谱仪系统的的结构是否合理。无论是自己装填的还是购买的色谱柱，使用前都要对其性能进行考察，使用期间或放置一段时间后也要重新检查。柱性能指标包括在一定实验条件下（样品、流动相、流速、温度）下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性，或分离度。上海高信化玻是德国merck专业代理商。湖北上海Merck默克

在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。德国Merck默克代理商

    ⑤避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。⑥经常用强溶剂冲洗色谱柱，***保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序，作为参考：硅胶柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液，那么可以省略***用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质，在甲醇（乙腈）冲洗时重复注射100~200μl四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外，用乙腈、**和三氟醋酸（）梯度洗脱能除去蛋白质污染。阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交换性能强的盐。德国Merck默克代理商