信号弱
信号高
本底较高
准确度较低（一偶然误差）
计算的教据过高或过任《一系统误差，数据与"标准数据"的偏差）
可能的原因： 实验试剂使用错误实验试剂损坏
所用实验试剂稀释度错误仪器的过滤器选择错误（波长）前育时间过短，温度过低
试剂温度不正确
在较高浓度时，叠氮化钠、燕基乙身或DTT可能干扰过氧化物恃活性。所用实验试剂稀释度错误醇育时间过长，温度过高
洗洛不足洗得污染
试剂或小瓶/试管受到以前实验的污染
所用实验试剂（抗体和等结合物）稀释度错误 上海买Sigma抗体哪家靠谱？宝山区Calbiochem抗体抗体咨询报价
在保存抗体时请注意以下几点：
为保持比较大反应性，应按照厂家说明书保存试剂（如，当指定保存温度为2-8℃时，应避免将抗体置于室温下）。保存抗体的经验法则是将其置于非无霜冰箱/制冷机内的严格密封容器中，远离组织固定剂和交联试剂。除非加入稳定蛋白，如BSA（1% w/v），否则抗体不得
在工作液中长期保存。避免长期保存稀释的抗体。保存时遇到的主要问题是细菌或***污染。
如果抗体保存在2-8℃超过2-3天，建议进行过滤除菌和/或加入抑菌剂/防腐剂，如0.05%叠氮化钠或0.1%硫柳汞。 奉贤区CST抗体抗体批发上海益启订购抗体的服务电话是多少？
使用该分析法时的"夹心"产生过程∶
将一种纯化的、靶标特异性抗体（捕获"抗体）结合在因定相上一通常阔着在平板孔约底叔加入样品（可能含有未知量的抗原），使其与捕获抗体发生结合反应。通过洗涤除去未结合的样品。
加入一种标记抗体（检测抗体），使其与抗原结合。在双抗夹心ELISA中，捕获抗体和检测抗体的选择十分重要，直接关系到实验结果的准确性、特异性和灵敏度。
夹心法ELISA和竞争性ELISA之间的差别
Troubleshooting
问题：无信号
在本节中，将讨论目前仍在应用中的主要免疫技术理论和实验。
免疫学研究时间轴
1900.Ehrlich提出抗体形成理论
1938.Marrack提出抗原-抗体结合假说
1962.Edelman & Porter解析抗体分子结构
1975.Kohler & Milstein开发单克隆抗体产品
1986.采用基因工程生产乙肝疫苗
1900.Landsteiner & Levine使用天然抗血清识别ABO血型
1900.Nuttall, Wasserman &Schutze 采用沉淀素试验区分人乳、牛乳和山羊乳
1900-01.Uhlenhuth 关于鸡蛋蛋白分型的工作，在医学工作中用沉淀素反应进行人血液染色铺平了道路
1942.Coons等发表IHC关键研究。抗体是采用FITC标记的
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科研者实验和协作
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无信号 在检测之前，转印膜在贮藏过程中发
生蛋白降解
二抗选择错误
曝光时间太短
抗原上样量不足
抗原可能被破坏
检测系统
一抗的亲和力较低
化学发光底物已丧失活性。
已从膜上剥离抗体并再次杂交。
处理方法 使用新转的膜进行实验。
检查是否使用适当的二抗。
增加曝光时间。
在凝胶上载入更多的抗原，或在载入之前使用超滤管浓缩样品，
或使用免疫沉淀，以增加凝胶中的目标蛋白量。
检查确保电泳处理未破坏抗原性。
增加（和优化）一抗的浓度和培养时间、温度。 宝山区Calbiochem抗体抗体咨询报价
