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    不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5%的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡）。3、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。色谱柱样品制备1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。为获得比较好分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外比较高操作温度不要超过60℃。色谱柱保存操作1、如果流动相含有酸或无机盐，应当先用去离子水（20倍柱体积）冲洗干净。然后用用**乙腈或甲醇保存色谱柱。***用柱子的接头密封。双氧水测试条作为一种快速测试样品浓度的检测工具。北京中国Merck默克代理

    液相色谱柱的管理与保养色谱柱是液相色谱的心脏,在液相色谱仪的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命非常重要。色谱柱使用时间后就会出现柱压升高、柱效降低、峰形畸变和分离度降低、保留时间改变等变化,如不采取措施,将会缩短色谱柱的使用寿命,影响工作效率,并造成一定的经济损失。因此,有必要加强和规范色谱柱的管理,从而延长色谱柱的使用寿命。本文从影响色谱柱使用寿命的几个因素出发，从管理的角度，探讨色谱柱的维护与保养。1色谱柱的类型常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶、离子交换树脂、凝胶或玻璃微球等填充剂。在化学键合硅胶中以十六烷基硅烷键合硅胶*常用,辛基硅烷键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用。近年来,由于蛋白质等生物大分子物质分离提纯技术的飞速发展,离子交换色谱柱、凝胶色谱柱的应用也越来越广。2影响色谱柱使用寿命的因素流动相※在以水溶液为流动相时,水溶液中的微生物例如细菌容易生长,当用水溶液或有机酸缓冲液保护柱子时,一些霉菌可能在色谱柱中滋生,堵塞固定相颗粒间的空隙。※由于湿法填充技术的问世,目前普遍使用的色谱柱填料直径一般都小于10um。天津正规默克试剂上海高信化玻是德国默克中国***代理商。

    填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高;小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提**离度，但不是*有的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很有用的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。三、如何保证良好的柱性能与柱寿命◆认证阅读色谱柱使用说明书;◆使用填充良好的色谱柱;◆尽量减少压力波动，避免机械及热冲击;◆使用保护柱及在线过滤器;◆经常以强溶剂冲洗色谱柱;◆充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与强保留成分;◆用稳定的固定相(C18**稳定);◆在中等PH值操作(6~8)，用有机缓冲溶液;◆色谱柱使用温度小于40℃;◆硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的PH值范围在◆在水流动相与缓冲溶液中加200ppm的叠氮钠;◆流动相中含有缓冲溶液，应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5%;◆过夜或贮存时。

    正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份较早被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(MethyleneChloride)等。2、反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合较早被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。二、聚合物填料聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～14均可使用。相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。三、其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般***于特殊的用途。色谱是一种分离分析手段，分离是**。

    MERCKMILLIPORE默克密理博Synergy超纯水系统市场价。Millipore密理博Synergy系统按其设计，适用于那些已有纯水供应，但还需要一个即用型系统来提供高质量超纯水的实验室。紧凑的设计保证可以在实验室中的任何位置轻松地安装，台式或挂墙均可。Synergy系统可定量供应I级水并在供应了设定的体积后自动关闭。对于要求**有机污染物含量的应用，Synergy系统中还加入了一个双波长UV灯以确保产水TOC小于5ppb（进水TOC小于50ppb），使之适合于HPLC、GC、ILC和TOC分析。使用BioPak™纯化柱作为终端过滤器，Synergy系统可以产生无热源、无RNase水。MERCKMILLIPORE默克密理博Direct-Q5超纯水系统市场价。Millipore密理博Direct-Q5实验室水纯化系统是为每日超纯水用量为5至15L，但又不能获得有质量保证的预处理水做进水的研究人员而设计的装置。这种设计紧凑的静音系统可直接从自来水以的的流速生产超纯（I级）水。Direct-Q系统性能特征通过压力、温度和电阻率传感器进行自动监控，并清晰地显示在系统显示屏上，该显示屏还指示用户何时应当进行日常维护。测试条的基质为PET材料，反应区的化学试剂含量非常少，这些特征使得测试条在使用后，非常容易处理。天津正规默克试剂

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    如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化锆填料也可用于HPLC，商品化的*有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用PH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。北京中国Merck默克代理

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