液相色谱柱的管理与保养色谱柱是液相色谱的心脏,在液相色谱仪的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命非常重要。色谱柱使用时间后就会出现柱压升高、柱效降低、峰形畸变和分离度降低、保留时间改变等变化,如不采取措施,将会缩短色谱柱的使用寿命,影响工作效率,并造成一定的经济损失。因此,有必要加强和规范色谱柱的管理,从而延长色谱柱的使用寿命。本文从影响色谱柱使用寿命的几个因素出发,从管理的角度,探讨色谱柱的维护与保养。1色谱柱的类型常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶、离子交换树脂、凝胶或玻璃微球等填充剂。在化学键合硅胶中以十六烷基硅烷键合硅胶*常用,辛基硅烷键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用。近年来,由于蛋白质等生物大分子物质分离提纯技术的飞速发展,离子交换色谱柱、凝胶色谱柱的应用也越来越广。2影响色谱柱使用寿命的因素流动相※在以水溶液为流动相时,水溶液中的微生物例如细菌容易生长,当用水溶液或有机酸缓冲液保护柱子时,一些霉菌可能在色谱柱中滋生,堵塞固定相颗粒间的空隙。※由于湿法填充技术的问世,目前普遍使用的色谱柱填料直径一般都小于10um。色谱柱由柱管、压帽、卡套、筛板、接头、螺丝等组成。中国Merck默克色谱柱
酸性有机物吸附在固定相的用低pH缓冲液冲洗,碱性有机物用高pH缓冲液冲洗,然后再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸馏水冲洗。凝胶色谱柱:※由于凝胶色谱柱是根据被分离物质的分子量大小而分离物质,通常用稀的氢氧化钠或非离子型去垢剂()冲洗可除去大部分的结合物质,如果一些污染物仍然不能***时,用24%或30%乙腈冲洗过夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去亲水蛋白,用蛋白水解酶处理可分解凝胶中剩余的痕量胃蛋白酶,然后再用蒸馏水←→甲醇←→蒸馏水冲洗。已污染的色谱柱的处理:※因保留强的物质污染,流动相或样品中不溶物沉积于柱头,可用下列方法洗涤:去除脂类可用四氢呋喃、乙腈或甲醇洗涤;去除蛋白质可用乙腈、丙醇和1%三lvyisuan进行梯度洗脱;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱,同时反复注入100-200ml的四氢呋喃。柱头处理:※对于柱头堵塞污染严重的情况而且用溶剂冲洗无效的色谱柱,只有打开柱子去除柱顶的填料重装:先拆下不锈钢烧结过滤器,检查柱床,常见凹陷或受污染的带色填料,剔去不规则床层和带色填料,使柱床显白色并完全水平,再用甲醇作糊状填料匀浆液,将糊状填料匀浆液滴在柱上靠重力从匀浆液中排出甲醇液,重复直到填料水平。上海正规默克代理过硫酸钾,无机化合物,白色结晶,无气味,有潮解性。
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组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时,缓冲作用减小,缓冲能力降低,当c(盐)/c(酸)为1∶1时△pH**小,缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算:此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远,缓冲能力愈小,甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系,存在有效缓冲范围,这个范围大致在pKaφ(或pKbφ)两侧各一个pH单位之内。弱酸及其盐(弱酸及其共轭碱)体系pH=pKaφ±1弱碱及其盐(弱碱及其共轭酸)体系pOH=pKbφ±1例如HAc的pKaφ为4.76,所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76~5.76的缓冲溶液,在这个范围内有较大的缓冲作用。配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力比较大,此时(c(HAc)/c(NaAc)=1。色谱柱两端的柱接头内装有筛板,是烧结不锈钢或钛合金,取决于填料粒度,目的是防止填料漏出。
细胞计数的疾速体验细胞计数一直是件繁琐而费时的工作,而细胞密度的一致性又是实验结果重复性和准确性的保障,所以对细胞计数要求准确,一致,快速。传统的血球计数板虽然廉价,但是费时费力,而且结果也是因人而异。全自动细胞计数器一般都价格昂贵,使得大多数科研人员望而却步。为了解决这个两难的处境,密理博推出了比较.新产品Scepter—手持式细胞计数器,以合理的价格,精确而迅速的细胞计数,一举荣获美国实验室仪器很受欢迎奖。Scepter—手持式细胞计数器依据电阻抗原理,以其小巧的移液***式设计,让操作者只需轻轻一按,细胞就可被自动吸入计数,结果以图形的形式显示细胞的直径和体积,提供细胞密度和细胞群分布数据,为掌控细胞健康状况提供了便捷的量化手段, 双氧水测试条价格相对便宜,对生态和环境影响小。河南德国默克化工
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具有优良的导电性、导热性及电磁屏蔽特性。更为难能可贵的是,多孔性碳材料以其结构的特点而具有很好的吸附性及选择性。正是碳材料的这些特性,使人们期待它在色谱领域中能有特殊的用途。2、贯流色谱填料贯流色谱是20世纪80年代末至90年代初发展起来的一种色谱分离新方法。在这种填料上,既有通常的微孔或大孔,例如50~150nm的微孔,又有贯穿整个颗粒的,孔径约600~800nm超大孔存在。这种贯穿的大孔,可以允许流动相直接进入填料颗粒的内部并贯穿而过。这样,就相当于极大地降低了填料颗粒的直径,即以贯穿孔将填料分割成了很多更细小的颗粒,在这种小颗粒上的微孔已经短到不对传质过程构成明显的阻力。因此,在这种贯流色谱填料上,传质阻力已经非常小。同时,贯穿孔内流动相的线速度正比于柱子中流动相的速度,即传质过程已由扩散传质变为对流传质。这就意味着,在一定范围内,及时提高流动相速度,也不会降低柱子的分离效率。由于填料上同时还存在有通常的多孔结构,其比表面积并未随贯穿孔的出现而大幅度降低。因此,在这种填料上的样品负载量也不随流速的增加而减少。再者,填料上600~800nm的贯穿孔,极大地增加了柱子的通透性,使得这种柱子即使工作于很高的流速下。中国Merck默克色谱柱
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