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截留

截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近

的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH 或离子强

度改变的情况下倾向于聚集或改变构象，因此其有效大小可能比 “天然”

分子大恨多，从而导致排阻增加。比如，有些蛋白质在某些缓冲液条件下

会发生多聚化，而另一些则发生解聚（如血红素蛋白）成亚基。这使选择

合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验，我们通常推荐选择

为目的分子大小一半的膜作为尝试的优先，再根据实际情况加以调整。 上海超滤浓缩管销售公司。松江区默克0.5ml超滤浓缩管批发

核苷酸截留分子量（NCO）

超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的，适合各种蛋白研究，但在核酸

和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏

过，相对于球形蛋白需要更致密的膜（截留分子量更小）。所以选择

滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。

浓差极化

浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞，产生除了膜本身截留分

子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时，会形成相当于第二层滤膜作

用的胶体层，干扰分子通过滤膜，同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分

也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。

外泌体的精制磁珠法富集精制外泌体：300μg样品（相当于300μg总蛋白）用含有5μg anti-CD63抗体的溶液稀释，与protein A/G磁珠共孵育1hr，漂洗后用0.2M glycine洗脱。如果要先将抗体偶联在磁珠上（以避免抗体洗脱下来对外泌体的干扰），请参考默克磁珠操作说明书。（Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3)）。推荐使用试剂目录号信息：cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。

默克已经建立了基于“微滤+超滤”的外泌体制备操作标准，相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心，用实验室常见的工具解决外泌体制备的高大上问题，真是惠而不费，不亦乐乎？

默克密理博 Amicon® Ultra 离心式超滤管因其完美的设计

一经推出即成为生物样品操作的行业**产品。不论是蛋白、

核酸、***或颗粒物，抑或低浓度样品或宝贵的活性样品，

Amicon® Ultra 都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准

化，并满足下游各种应用的要求，使研究者处理样品时倍感轻

松。

Amicon® Ultra 超滤管的独特优点：

有效浓缩同时保证比较高的蛋白回收率

合理的死体积设计

•避免样品离干而降低回收率

•便于估计和控制样品浓缩倍数

•重复性好，便于样品数据相互比较 超滤浓缩管代理销售哪家比较靠谱。

特点与优点：

特别的反转离心回收设计，滞留体积很小，样品损失少，

样品回收率通常>90%

浓缩倍数达到50-200倍

Ultracel®再生纤维素膜和聚丙烯外壳将吸附降至比较低

特别设计的死体积防止离干，保证样品回收率和活性

有四种截留分子量供选择

法医gDNA鉴定、PCR产物纯化与小分子分离

Microcon® 超滤管

Microcon®为横膜式超滤管，没有死体积，用于大分子样品的浓缩、脱

盐、换液都非常高效方便。实际应用中还常用于大分子与其它分子的分

离，比如蛋白酶切后的处理及药物结合率分析等等。 超滤浓缩管的优点有很多。徐汇区浓缩管规格

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用超滤对分子进行分级

通过选定截留分子量的超滤操作能精确地将混在大分子中的小分子去

除的想法常常不切实际。事实上，膜的规格描述是基于截留而非通过

的性质。一项实验中，采用 100k NMWL 滤膜，大于 100kDa 的分子截

留率 >90%，但这时比膜孔径小的分子并不是完全自由地通过滤膜，

75kDa 的分子截留率为 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的

溶液中的各 种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实

践中，如果要分离两种大分子，它们之间的分子量差异应该达到 10 倍

以上，或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间，则可达到比较理想的

分离。如果蛋白溶液较为稀释，低压下操作也有助于达到更好的效果。 松江区默克0.5ml超滤浓缩管批发

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