Recombinant Mouse Semaphorin 4D/SEMA4D/CD100 Protein

牛痘DNA拓扑异构酶I（VacciniaVirusDNATopoisomeraseI）在实验室中的使用主要涉及以下几个步骤：1.**DNA载体连接**：-牛痘DNA拓扑异构酶I可以用于DNA载体连接，特别是在TOPO克隆载体制备中。它能够识别并切割双链DNA末端[5’C(T)CCTT]，并与DNA形成共价连接形成稳定复合物，遇到DNA的5’-OH基团后，重新连接形成完整DNA链。2.**接头连接**：-在NGS建库中，牛痘DNA拓扑异构酶I可用于接头连接。这包括将含有特定序列的接头A和接头B与酶一起孵育，以实现DNA片段的连接。3.**操作步骤**：-**质粒解旋**：将超螺旋质粒DNA与牛痘DNA拓扑异构酶I混合，在37°C下孵育5-15分钟，以实现质粒的解旋。-**接头连接**：将接头A（含CCCTT序列）和接头B（含5’OH）与牛痘DNA拓扑异构酶I混合，在37°C下孵育5-15分钟，以实现接头的连接。4.**注意事项**：-双链接头A通常5’端做NH2封闭修饰，以防止自连接；接头A的CCCTT后通常包含5-12bp尾巴，再长的尾巴会导致连接效率大幅下降。-双链接头B的5’端必须包含-OH。-由于该酶应用广，在不同的实验中使用策略不同，需要灵活运用，并根据具体文献进行调整。

利用His标签通过亲和层析从细胞裂解物中纯化目标蛋白，然后可能通过离子交换层析、等方法进一步提纯。Recombinant Mouse Semaphorin 4D/SEMA4D/CD100 Protein,His Tag

牛痘DNA拓扑异构酶I（VacciniaVirusDNATopoisomeraseI）是一种来源于牛痘病毒的I型真核拓扑异构酶，具有以下功能和应用：1.**功能**：-牛痘DNA拓扑异构酶I可以催化双链DNA分子中单链DNA特定序列位置的磷酸二酯键的断开和连接。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性，能够通过快速的酶切和连接使双链共价闭合环状的正或负超螺旋DNA发生解超螺旋，形成含有较少的正或负超螺旋的双链环状DNA分子。-能够使双链DNA形成绳结(knotting)或解开绳结(unknotting)，联结互补的单链环状DNA成为双链环状DNA。2.**应用**：-作为一种DNA重组连接的新型工具酶，用于DNA载体和重组片段的连接、缺刻修复、接头连接等。-适用于TOPO克隆载体的制备、NGS建库中的接头连接等。-在TOPO克隆技术中，DNA拓扑异构酶I同时具有限制酶和连接酶特性，其生物学功能是在复制期间切割并重新连接DNA。3.**使用方法**：-用于DNA快速酶切流程，包括配制体系反应液、轻柔混匀、37℃孵育15分钟等步骤。4.**储存条件**：-建议在-25～-15℃保存，有效期为3年。5.**注意事项**：-避免起泡或剧烈搅拌、涡旋等操作，以防止酶失活。牛痘DNA拓扑异构酶I因其独特的功能，在分子生物学研究和基因工程中扮演着重要的角色。Recombinant Human IgG4 Fc Protein中间的催化结构域以及 C 端结构域，这种多结构域的组成使 Tn5 转座酶能精细地与 DNA 相互作用并发挥其功能。

DNA片段大小对磁珠法DNA凝胶回收试剂盒的回收率有影响。根据搜索结果，我们可以得出以下结论：1.**小片段DNA（小于200bp）**：对于小于200bp的DNA片段，回收率会下降。这是因为小片段的DNA与固相基质的结合力相对较弱，因此相对损失较大，导致回收率降低。在某些情况下，小于100bp的DNA片段的回收率可能只有30-60%。2.**中等大小片段DNA（200bp-4kb）**：在这个范围内的DNA片段，通常回收率较高，可以达到80-95%。这是因为这些片段大小适中，既不会因太小而损失，也不会因太大而难以洗脱。3.**大片段DNA（大于4kb）**：对于大于4kb的DNA片段，回收率也会下降，通常在30-50%之间。这是因为大片段的DNA与固相基质的结合力更强，因此更难洗脱。4.**片段大小与回收率的关系**：DNA片段越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就越低。相反，DNA的量越少，相对损失越大，回收率也越低。5.**操作技巧**：为了提高回收率，可以采取一些操作技巧，比如减少切胶体积、确保溶胶彻底、使用合适的洗脱液体积和pH值等。

磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒与传统纯化方法相比具有以下优势：1.**操作简便快捷**：磁珠法纯化过程通常可以在15分钟内完成，包括结合、洗涤和洗脱步骤，无需复杂的离心或抽滤操作。2.**高纯度和高回收率**：磁珠法纯化得到的DNA纯度高，通常回收率可以达到90%以上，适用于100bp以上的DNA片段的纯化，对达到10kb片段DNA的纯化也能保持较好的效果。3.**适用性广**：磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒适用于多种样本类型，包括PCR产物、酶切产物、连接产物等，也适用于低浓度样品的浓缩。4.**安全性高**：操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂，更加环保和安全。5.**灵活性**：可以根据实际状况灵活调节磁珠用量，适应不同体积和浓度的样品处理。6.**自动化和高通量**：磁珠法纯化试剂盒适合手工操作，也可用于自动化工作站或核酸自动提取仪，实现高通量操作。7.**温和的条件**：磁珠法条件温和，对DNA的损伤小，适合后续的多种分子生物学实验，如酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等。8.DNA片段适应性**：适用于从150bp到50kb的DNA片段的纯化，能够满足大多数分子生物学实验的需求。

ExoIII（ExonucleaseIII）和Lambda核酸外切酶（λExonuclease）在DNA末端处理上的主要不同点如下：1.**作用方向**：-**ExoIII**：具有3'→5'外切脱氧核糖核酸酶活性，它从DNA链的3'-OH末端逐步切去单核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**：是一种5'→3'核酸外切酶，能选择性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的双链DNA。2.**底物特异性**：-**ExoIII**：适底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口。由于对单链DNA无活性，因此难以切割3'突出末端。-**Lambda核酸外切酶**：适底物是5'磷酸化的双链DNA，对单链DNA和5'端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低，不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。3.**活性差异**：-**ExoIII**：对具有3'-突出末端(至少有4个碱基，且具有3'-末端C残基)的DNA、单链DNA、硫代磷酸酯连接的核苷酸无活性。-**Lambda核酸外切酶**：对5'-OH端的切割速度比5'-P端慢约20倍；对单链DNA的酶切速度比双链DNA慢约100倍。4.**应用场景**：-**ExoIII**：可以用于生产特定方向的单链DNA，将线性化DNA设计成为一端为不切割末端（3'突出端），另一端则设计为易切割末端（平端或5'突出端）。

FnCas12a产品不含DNA内切酶和外切酶，也不含RNA酶，保证了实验的准确性和重复性。Recombinant Mouse Semaphorin 4D/SEMA4D/CD100 Protein,His Tag

T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因编辑中的应用主要体现在突变体检测和基因编辑效率评估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具体应用步骤和特点：1.**基因编辑效率评估**：-T7EI用于评估CRISPR-Cas9在给定的导向RNA靶位点上对细胞群体进行基因编辑的效率。-通过PCR扩增围绕CRISPR导向RNA靶位点的基因组DNA，如果CRISPR-Cas9介导的非同源末端连接（NHEJ）修复事件引入了突变，变性和退火将形成突变型和野生型PCR扩增子的异源双链DNA。2.**突变体检测**：-如果CRISPR/Cas9编辑成功在DNA上引入突变，则可与野生型DNA片段退火产生异质双链DNA。T7EI可以识别该DNA上的不完全配对的DNA位点然后进行双链切割，通过琼脂糖凝胶电泳即可显示酶切后的条带，从而半定量判定基因编辑效果。-T7EI能识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA，不能识别1bp的插入、缺失或突变。3.**实验步骤**：-收集细胞并提取基因组DNA，然后使用PCR扩增期望编辑的基因组区域。扩增子的长度建议为0.5-1kb。-对扩增的DNA进行变性和退火复性，以产生异质双链DNA。-使用T7EI酶处理退火后的DNA产物，在37℃孵育15分钟。