磁珠法提取的DNA通常指的是通过磁珠吸附技术从样本中纯化得到的核酸,而基因组DNA(gDNA)是指一个生物体细胞核中包含的全套遗传信息的DNA。两者的主要区别在于:1.**来源和组成**:-磁珠法提取的DNA可以是基因组DNA,也可以是质粒DNA、线粒体DNA等其他类型的DNA。它是一个广的概念,指的是通过磁珠法技术提取的任何类型的DNA。-基因组DNA特指一个生物体细胞核中的DNA,包含了所有的基因信息,以及可能的非编码区域。它通常包含了大量的碱基对,如人类基因组由大约30亿个碱基对组成。2.**纯度和应用**:-磁珠法提取的DNA的纯度和质量取决于提取过程中的裂解、吸附、洗涤和洗脱步骤,以及磁珠的质量和操作条件。高质量的磁珠法提取的DNA可以用于多种分子生物学实验,如PCR、克隆、测序等。-基因组DNA的提取通常需要考虑其完整性和纯度,以确保后续实验的准确性。基因组DNA提取的难点在于血液样本成分复杂,且白细胞体积占比低,因此提取纯化难度较高。3.**提取方法**:-磁珠法提取DNA是一种高效、快速的核酸提取技术,它利用磁珠表面修饰的特定官能团与核酸的特异性结合,通过外加磁场实现核酸与杂质的快速分离。泛素连接酶E3识别特定的靶蛋白,并促进E2上的泛素转移到靶蛋白的赖氨酸残基上,形成泛素化标记。Recombinant Cynomolgus FOLR2 Protein,His Tag
BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一种来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的DNA聚合酶。这种酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性,但缺失了5'-3'核酸外切酶结构域,因此它具有链置换活性,可以用于重组酶聚合酶扩增(RPA)等恒温扩增技术。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些关键特性和应用:1.**活性定义**:在37°C条件下,30分钟内将10nmol的dNTP掺入酸不溶性物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。2.**热失活条件**:75°C,20分钟。3.**酶保存液成分**:25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**储存条件**:-25~-15°C保存,有效期2年。5.**注意事项**:-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性,BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配对的突出末端,因而不适用于生成平齐末端。-25°C时BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性,是同温度下Klenow片段(3'-5'exo-)的两倍。6.**应用**:-随机引物法标记。-cDNA第二条链的合成。-单个dA的加尾。-链置换的DNA合成。Recombinant Human APOA1 Protein,hFc TagUBE2L3与其他E2酶的区别在于它具有特定的结构特征,它包含一个高度保守的UBC结构域,这是E2酶家族的标志。
BsuDNAPolymerase(嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶)与其他DNA聚合酶相比,具有一些独特的特性和优势:1.**链置换活性**:BsuDNAPolymerase保留了BacillussubtilisDNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性,但缺乏5'→3'核酸外切酶结构域,这使得它具有链置换DNA合成的能力。这种能力对于等温扩增技术如重组酶聚合酶扩增(RPA)和环介导等温扩增(LAMP)非常重要,因为它可以分离双链DNA,允许新的DNA链的合成。2.**温度稳定性**:BsuDNAPolymerase在高温下保持活性,这使得它适用于需要在较高温度下进行的扩增反应,如RPA技术中的65°C反应条件。3.**无核酸外切酶活性**:BsuDNAPolymerase缺乏3'→5'和5'→3'核酸外切酶活性,这意味着它不会像某些其他聚合酶那样在合成过程中具有校对功能。这可以减少非特异性扩增,提高扩增的特异性。4.**高灵敏度和特异性**:BsuDNAPolymerase在等温扩增中展现出高灵敏度,能够将微量核酸模板扩增到可检测水平,同时保持高特异性。5.**简化的操作流程**:与其他需要复杂操作和多个步骤的DNA聚合酶相比,BsuDNAPolymerase在等温扩增技术中的应用简化了操作流程,因为它不需要热循环仪,这使得它适合现场快速检测和诊断。
T7EndonucleaseI(T7EI)是一种特殊的DNA内切酶,具有以下特点:1.**识别错配DNA**:T7EI能够识别并切割不完全配对的DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA以及异源双链DNA。2.**切割位点**:T7EI切割错配位点5'端的、第二或第三个磷酸二酯键。3.**灵敏度**:T7EI对错配DNA的识别非常灵敏,能够检测并切割单碱基和多碱基的错配。4.**应用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因编辑技术导致的基因突变的鉴定。它通过识别错配DNA来帮助鉴定基因编辑是否成功以及是否有非目标效应。5.**直接电泳检测**:T7EI的产物可以直接通过电泳进行检测,这使得它在实验操作中更为方便。6.**来源**:T7EI来源于大肠杆菌菌株,是一种麦芽糖结合蛋白(MBP)和T7核酸内切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:尽管T7EI在商业上使用时成本较高,但它在大规模样本测试中,尤其是在基因突变鉴定方面,提供了一种有效的筛选方法。8.**特殊注意事项**:T7EI能够识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA,但不能识别1bp的插入、缺失或突变。这些特点使得T7EndonucleaseI成为基因突变鉴定中一个非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因编辑技术的应用中。泛素分子可以通过其内部的赖氨酸残基与其他泛素分子形成多聚泛素链,这一步骤通常由E3酶催化。
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,简称λExonuclease)是一种具有特定特性和应用的酶,以下是其主要特点和应用:1.**特异性作用**:λExonuclease是一种5'→3'核酸外切酶,能选择性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的双链DNA。2.**酶切活性**:对单链DNA和5'端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低,不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。3.**嗜磷酸性**:该酶具有非常强的嗜磷酸性,磷酸化的核酸链与非磷酸化的核酸链的切割效率相差达200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一种具有高度持续性的碱性核酸外切酶,可以连续地将核酸切割成为单个碱基,切割比较高速率可以达到1000nt/S。5.**应用领域**:-生成单链PCR产物用于DNA测序。-DNA单链构象多态性(SSCP)分析。-滚环扩增。-从双链DNA片段生成单链DNA。-PCR产物的克隆。-质粒制备净化。6.**酶活性定义**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37ºCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。Uracil-DNA Glycosylase (UDG) 是一种在DNA修复过程中起作用的酶,其主要功能是识别并去除DNA中的尿嘧啶碱基。Recombinant Mouse FAP Protein,His Tag
通过优化crRNA的设计,可以提高FnCas12a的特异性和灵敏度,例如在microRNA检测中 。Recombinant Cynomolgus FOLR2 Protein,His Tag
Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在PCR产物的克隆中主要应用在以下几个方面:1.**单链DNA的生成**:-Lambda核酸外切酶可以用于从双链DNA中生成单链DNA。由于该酶沿5'→3'方向逐步切去5'单核苷酸,底物是5'磷酸化的双链DNA,因此可以用来消化PCR产物中的一条链,从而生成单链DNA,这对于某些克隆技术来说是必要的步骤。2.**PCR产物的克隆**:-在克隆过程中,有时需要将PCR产物的5'端磷酸化,以便与载体连接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA,从而在一定程度上帮助准备适合克隆的PCR产物。3.**减少自身环化和非特异性连接**:-在连接反应中,为了减少质粒载体的自身环化,可以使用碱性磷酸酶处理质粒DNA以去除5'磷酸基团。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA,因此在某些情况下,它可以辅助减少PCR产物的自身环化,尤其是在PCR产物和质粒载体的连接反应中。4.**提高克隆效率**:-通过消化PCR产物中的一条链,Lambda核酸外切酶可以帮助减少PCR产物的非特异性连接,从而提高克隆的效率和准确性。综上所述,Lambda核酸外切酶在PCR产物的克隆中主要通过生成单链DNA、准备适合克隆的PCR产物、减少自身环化和非特异性连接以及提高克隆效率等方面发挥作用。Recombinant Cynomolgus FOLR2 Protein,His Tag
在PCR实验中,确保引物与目标序列的完全特异性是至关重要的,这可以通过以下几个步骤实现:1.**基于已知序列设计引物**:根据目标DNA序列,使用计算机软件(如Primer3、Snapgene等)设计出两个互补的引物,以保证引物的特异性和准确性。2.**引物长度和Tm值**:通常选择引物长度为18-25个核苷酸,引物的Tm值(熔解温度)通常选择在50-60℃之间,以保证引物和目标DNA序列的稳定性。3.**避免与其他DNA序列的交叉反应**:使用BLAST等计算机软件进行引物特异性检查,确保引物只与目标序列互补,而不与其他非目标序列发生杂交。4.**避免引物自身结合**:设计引物时要避免引物之...