1951年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基的种类相当多。合成培养基成分已知,便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比,有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代,因此,细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分,以克服合成培养基的不足。普遍的作法是加入小牛血清。动物血清成分复杂,各种生物大小分子混合在一起,有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效,但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限,成本高,限制了它的大量使用。无血清培养基不加动物血清,在基础培养基中加入细胞生长有效因子等。细菌类培养基则包括马铃薯葡萄糖琼脂培养基、麦芽琼脂培养基等等。金黄色葡萄球菌显色培养基
培养细胞时应使用5%还是10%CO2,或者根本没有影响?一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。NaHCO3的作用:培养基中使用了 NaHCO3-CO2 缓冲系统,并采用开放培养,使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶,再通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%) ,与培养基中的NaHCO3处于平衡状态,从而调节培养基的PH值。NEAA:非必须氨基酸,NEAA(非必需氨基酸) 是含几种非必需氨基酸的合剂,添加到的原培养基不同,NEAA 也有不同的种类,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。LB肉汤(Lennox)常用的培养基中添加的基本营养物质包括碳源、氮源、磷酸盐、有机物、无机盐和微量元素。
培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的较适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。值得注意的是,在微生物生长繁殖和代谢过程中,由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累,会导致培养基pH发生变化,若不对培养基pH条件进行控制,往往导致微生物生长速度下降或(和)代谢产物产量下降。因此,为了维持培养基pH的相对恒定,通常在培养基中加入pH缓冲剂,常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐(如KH2PO4和K2HPO4)组成的混合物。K2HPO4溶液呈碱性,KH2PO4溶液呈酸性,两种物质的等量混合溶液的pH为6.8。当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时,H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物,培养基pH不会过度降低;如果培养基中OH-浓度增加,OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物,培养基pH也不会过度升高。
细菌培养基之根瘤菌培养基:葡萄糖10g,磷酸氢二钾0.5g,碳酸钙3g,硫酸镁0.2g,酵母粉0.4琼脂20g,水1000ml,1%结晶紫溶液1ml。先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。放线菌培养基:(1)淀粉硝酸盐培养基(高氏一号培养基)可溶性淀粉2.0g,硝酸钾0.1g,磷酸氢二钾0.05g,氯化钠0.05g,硫酸镁0.05g,硫酸亚铁0.001g,琼脂2g,水100ml。先把淀粉放在烧杯里,用5ml水调成糊状后,倒入95ml水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.2-7.4,分装后灭菌,备用。特定的培养基可用于特定的微生物和组织细胞培养。
培养基按成分分类有哪些?上海瑞楚生物科技有限公司小编介绍,根据培养基的组成成分,可分为天然培养基和合成培养基两大类。天然培养基(native medium) 含有不完全明了化学成分的天然物质。如蛋白胨、牛肉膏(粉)、肉浸液、玉米浆、血液、马铃薯等。用此类材料配成的培养基很难做到不同批号之间质量的稳定一致,因此在选用原料时务必注明其商品名称、生产厂家及批号,对不同来源的原料应先做小样试验。此种培养基成本较低,细菌繁殖较好,一般细菌培养以选用天然培养基为主。培养基的配方也会受到环境、药物和其他外部压力的影响,因此,在实际应用中需要不断进行调整和改进。双倍乳糖胆盐(含中和剂)培养基基础
培养基是一种供养分离的微生物和生物样品的营养物质基质。金黄色葡萄球菌显色培养基
半组合培养基:指一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如,马铃薯蔗糖培养基。固体培养基:1.液体培养基:80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的营养成分的培养基。2.固体培养基:一类配制成的固体状态的基质。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。3.半固体培养基:指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。4.脱水培养基:又称预制干燥培养基,指含有除水分外的一切成分的商品培养基。金黄色葡萄球菌显色培养基
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